超排卵周期成熟失敗卵母細(xì)胞玻璃化冷凍研究.pdf

1、第一部分
　　 目的: （1）探討超排卵周期中成熟失敗卵母細(xì)胞行IVM技術(shù)的價值。(2)探討人工輔助激活對新鮮及凍融未成熟卵母細(xì)胞受精率和早期胚胎發(fā)育的影響。
　　 方法: 共收集154個ICSI周期中成熟失敗的500枚卵母細(xì)胞，隨機分成兩組：一組274枚未成熟卵母細(xì)胞行常規(guī)的玻璃化冷凍，其中MI期160枚，GV期114枚；另一組226枚未成熟卵母細(xì)胞作為新鮮對照組。試驗中，冷凍組未成熟卵母細(xì)胞凍融后行IVM培養(yǎng)，挑出發(fā)

2、育至MII期卵母細(xì)胞行ICSI授精，ICSI后部分卵母細(xì)胞入7％無水乙醇作用6分鐘（即人工輔助激活）后移入cleavage培養(yǎng)液中培養(yǎng)（激活組），另一部卵母細(xì)胞ICSI后直接入cleavage培養(yǎng)液中培養(yǎng)（非激活組）；新鮮對照組未成熟卵母細(xì)胞試驗過程同凍融組。ICSI后17-19h觀察第二極體排出及原核形成情況，挑出正常受精的胚胎繼續(xù)培養(yǎng)3-5天，期間觀察和記錄凍融后卵母細(xì)胞存活率、IVM后的成熟率、受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率、囊胚

3、形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚形成率。
　　 結(jié)果: （1）226枚新鮮未成熟卵母細(xì)胞獲得的成熟率為83.2％ (188/226)，ICSI 后受精率78.7％ (148/188)，卵裂率95.9％ (142/148),優(yōu)質(zhì)胚胎率19.7％ (28/142),囊胚率12.7％ (18/142)，優(yōu)質(zhì)囊胚率55.6％ (10/18)。新鮮激活組卵裂率、優(yōu)質(zhì)囊胚率明顯高于非激活組(P<0.05)，其中優(yōu)質(zhì)囊胚率差異極顯著(P<0.01)，成熟率、

4、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和囊胚形成率兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。⑵MI玻璃化冷凍組中，非激活組未獲得優(yōu)質(zhì)胚胎及囊胚，激活組獲得了27.2％（12/44）的優(yōu)質(zhì)胚胎率及18.2％(8/44)的囊胚率，其中優(yōu)質(zhì)囊胚率50％（4/8）。激活組優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚率明顯高于未激活組(P<0.01)，存活率、成熟率、受精率、卵裂率兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；GV玻璃化冷凍組中，對照組未獲得優(yōu)質(zhì)胚胎，激活組獲得了33.3％（4/12）

5、的優(yōu)質(zhì)胚胎率。激活組優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于非激活組(P<0.05)，存活率、成熟率、受精率、卵裂率兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(3)不考慮未成熟卵的成熟階段（MI+GV），玻璃化冷凍未激活組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯低于新鮮未激活組(P<0.01)，兩組間成熟率、受精率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；玻璃化冷凍激活組卵裂率明顯低于新鮮未激活組，而優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于新鮮未激活組 (P<0.05)，其中卵裂率差異極顯著(P<0.01)

6、，兩組間成熟率、受精率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論: ⑴超排卵周期所獲成熟失敗未成熟卵母細(xì)胞IVM技術(shù)具有可行性，應(yīng)該加以充分利用以提高累積妊娠率。⑵人工輔助激活技術(shù)可提高源于新鮮和凍融未成熟卵母細(xì)胞的胚胎的早期發(fā)育潛能。(3)冷凍對未成熟卵的胚胎發(fā)育造成了不利的影響，人工輔助激活技術(shù)似乎對冷凍損傷有部分的修復(fù)作用。
　　 第二部分
　　 目的: 通過外加滲透的方式讓海藻糖進入未成熟卵母細(xì)胞內(nèi)，

7、探討海藻糖作為細(xì)胞內(nèi)冷凍保護劑是否會提高人未成熟卵母細(xì)胞的玻璃化冷凍效率。
　　 方法: 收集常規(guī)的超排卵周期中成熟失敗的未成熟卵母細(xì)胞296枚隨機分成兩組，一組168枚未成熟卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移至海藻糖培養(yǎng)液中37℃放置30min 后行常規(guī)的玻璃化冷凍，其中MI期70枚，GV期58枚。另一組128枚未成熟卵母細(xì)胞行常規(guī)玻璃化冷凍作為對照組，其中MI期80枚，GV期88枚。兩組卵母細(xì)胞解凍后所獲未成熟卵母細(xì)胞經(jīng)IVM培養(yǎng)，發(fā)育至MII期

8、卵母細(xì)胞行ICSI授精。17-19h后觀察第二極體排出及原核形成情況。正常受精的胚胎繼續(xù)培養(yǎng)3-5天。觀察未成熟卵母細(xì)胞成熟率、受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率、囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚形成率。
　　 結(jié)果: （1）MI普通玻璃化冷凍組未獲得優(yōu)質(zhì)胚胎及囊胚。MI海藻糖玻璃化冷凍組獲得了30.0％（6/20）的優(yōu)質(zhì)胚胎率及10％(2/20)的囊胚率。MI海藻糖玻璃化冷凍組卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于MI普通玻璃化冷凍組(P<0.05)，成

9、熟率、受精率明顯低于MI普通玻璃化冷凍組(P<0.05)，其中成熟率、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率差異極顯著(P<0.01)。存活率兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。⑵GV海藻糖玻璃化冷凍組與普通玻璃化冷凍組間存活率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，GV期海藻糖玻璃化冷凍組僅獲得2枚成熟卵,成熟率明顯低于GV普通玻璃化冷凍組(P<0.01)。GV期海藻糖玻璃化冷凍組所獲2枚成熟卵均異常受精，未能獲得胚胎。
　　 結(jié)論: ⑴ 海藻糖作