不同培養(yǎng)條件對嘎拉蘋果愈傷組織遺傳變異的影響研究.pdf

1、　　本實驗對嘎拉(Gala)蘋果單芽系組培苗的獲得，葉片愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代以及愈傷組織在分子水平上的遺傳變異進行了系統(tǒng)的研究，主要研究結(jié)果如下：　　1.以室內(nèi)水培萌發(fā)的芽為外植體，最佳消毒方法是0.1﹪HgCl2+吐溫(2滴)消毒7min；防止褐化以培養(yǎng)基中添加4g·L-1PVP，芽接種后暗培養(yǎng)10d并結(jié)合3d更換一次培養(yǎng)基效果好；最佳誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)基是MS+BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1，繼代、擴繁培養(yǎng)基是MS+

2、BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1；繼代周期以28-30d為宜。　　2.以嘎拉蘋果單芽系組培苗葉片為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，最佳培養(yǎng)基為MS+蔗糖30g·L-1+2，4-D2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+BA2.0mg·L-1，誘導(dǎo)率可達93.7﹪。在愈傷組織誘導(dǎo)過程中，2，4-D起著主導(dǎo)作用。愈傷組織的產(chǎn)生首先需要黑暗條件的啟動，其增殖與生長分化則需在光下進行；接種后直接進行光照處理，抑制愈傷組織形成。愈傷組

3、織繼代周期以15-30d為宜。 3.在SSR擴增過程中，對反應(yīng)體系中的模板DNA濃度、MgCl2濃度、TaqDNA聚合酶濃度、dNTP濃度及引物濃度5個因子設(shè)立正交試驗，建立了SSR擴增反應(yīng)體系：25μL反應(yīng)體系中，10×Buffer2.5μL，MgCl2(25mM)4μL；dNTP(2.5mM)4μL；primer(10μM)1μL；DNA35ng；TaqDNApolymerase1U?！　?6對SSR引物中篩選出多態(tài)性最

4、佳的CH02D12(F：AACCAGATTTGCTTGCCATC，R：GCTGGTGGTAAACGTGGTG)用于變異的檢測。　　利用SSR-PCR擴增對不同培養(yǎng)條件下的愈傷組織進行了遺傳變異的鑒定。結(jié)果表明，在愈傷組織的培養(yǎng)過程中，變異是普遍存在的。不同物質(zhì)對愈傷組織變異的影響由大到小依次為：蔗糖＞2，4-D＞NAA=BA，愈傷組織變異頻率最小的水平分別為：蔗糖30g·L-1，2，4-D0.05mg·L-1，NAA0.5mg·L-1