NMDA受體在新生大鼠高氧性肺損傷后肺泡發(fā)育受阻及肺組織膠原沉積中的作用及機(jī)制探討.pdf

1、研究背景:氧療是改善機(jī)體缺氧狀態(tài)的一項重要措施，但長時間吸入高濃度氧(簡稱高氧)會導(dǎo)致不同程度的急慢性肺損傷。新生兒期是正常肺泡成熟的關(guān)鍵期，長期吸入高濃度氧可導(dǎo)致以彌漫性肺泡損害伴炎癥細(xì)胞浸潤為特征的急性肺損傷及以肺泡發(fā)育受阻和纖維化增生為主的慢性肺損傷(chronic lung disease CLD)。 CLD的發(fā)生一般認(rèn)為與早產(chǎn)、宮內(nèi)感染、炎癥、氧中毒、氣壓傷和營養(yǎng)等多種因素有關(guān)，吸入高濃度氧引起的氧化應(yīng)激與其發(fā)生密切相

2、關(guān)。雖然CLD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但由細(xì)胞因子介導(dǎo)的肺炎性反應(yīng)在CLD發(fā)生中的作用己被大量的臨床和動物實驗所證實，并且高氧誘導(dǎo)細(xì)胞因子表達(dá)的機(jī)制可能與核因子NF -κB的激活有關(guān)。NF-κB是一類能與多種基因啟動子部位κB位點發(fā)生特異性結(jié)合并促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)的總稱?；罨腘F-κB能與DNA特定的κB位點結(jié)合，啟動和調(diào)節(jié)眾多參與炎癥和免疫反應(yīng)有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，在機(jī)體的免疫應(yīng)答，炎癥反應(yīng)及細(xì)胞的生長發(fā)育中起重要作用，并參與高氧性肺損傷的發(fā)生

3、。體內(nèi)外研究均證明，高氧通過一系列激活連鎖反應(yīng)使NF-κB移位活化，參與調(diào)控多種細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、粘附分子、NO、細(xì)胞凋亡蛋白等的基因表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷導(dǎo)致高氧性肺損傷的發(fā)生和發(fā)展。 轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-beta，TGF-β)是一類重要的生長調(diào)節(jié)因子，在組織的發(fā)生、發(fā)育及損傷后修復(fù)中發(fā)揮著重要作用?；罨腡GF-β1過度表達(dá)對肺組織病理改變的影響非常顯著，特別是

4、致肺纖維化方面。由于堿性成纖維生長因子(basicfibroblast growth factor，bFGF)可促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增生和膠原纖維的合成而被認(rèn)為是另一個與肺纖維化有關(guān)的細(xì)胞因子。有實驗證明，高氧可誘導(dǎo)TGF-β1及bFGF釋放增加，提示可能在高氧所致的纖維性肺泡炎癥及后期的肺泡發(fā)育受阻和肺組織纖維化中起有重要的作用，但有待進(jìn)一步的證明。目前NMDA受體對持續(xù)高氧暴露下肺損傷后肺泡發(fā)育受阻和肺組織膠原沉積有何影響，及與高氧暴露

5、下肺組織中NF-κB活性、FGF-βκ1和bFGF含量變化有何關(guān)系尚不清楚，還有待進(jìn)一步闡明。實驗分為兩部分： 第一章 MK-801對持續(xù)高氧暴露下新生大鼠肺損傷的保護(hù)作用目的觀察NMDA受體拮抗劑MK-801對持續(xù)高氧暴露下新生大鼠肺損傷及損傷后膠原沉積和肺泡發(fā)育的保護(hù)作用。 第二章 NMDA受體介導(dǎo)新生大鼠高氧性肺損傷后肺組織膠原沉積及肺泡發(fā)育受阻的機(jī)制探討目的觀察MK-801對高氧暴露下新生大鼠肺組織TGF-β1、

6、bFGF及NF-κB表達(dá)的影響，進(jìn)一步闡明NMDA受體激活在高氧性肺損傷后肺泡發(fā)育受阻及肺組織膠原沉積中的作用及機(jī)制，為高氧所致慢性肺損傷的防治研究開辟新的途徑。 結(jié)果: 1．肺組織中TGF-β1mRNA水平及蛋白含量持續(xù)高氧暴露可導(dǎo)致肺組織中TGF-β1 mRNA水平的增加，高氧暴露7天時，高氧組肺組織TGF-β1mRNA水平明顯高于空氣組和空氣+MK-801組(P均<0.01)，高氧暴露14天時增高較空氣組和空氣+M

7、K-801組更為明顯(P均<0.01)；持續(xù)高氧暴露下肺組織TGF-β1蛋白含量與mRNA水平變化具有一致性。MK-801可降低持續(xù)高氧暴露7天及14天TGF-β1mRNA水平及蛋白含量的增加(P均<0.01)。 2．肺組織中bFGFmRNA水平及蛋白含量持續(xù)高氧暴露可導(dǎo)致bFGF mRNA水平的增高，至高氧暴露14天時高氧組肺組織bFGF mRNA水平顯著高于空氣組和空氣+MK-801組(P均<0.01)；持續(xù)高氧暴露下肺組織

8、bFGF蛋白含量與mRNA水平變化具有一致性。MK-801可抑制高氧暴露14天時bFGFmRNA水平及蛋白含量的增加(P<0.05，P<0.01)。 3．肺組織NF-κB表達(dá)高氧暴露7天時，高氧組肺組織細(xì)胞核明顯陽性著色，而胞漿陽性著色少，與空氣組、空氣+MK-801組比較差異有顯著性(P均<0.01)；持續(xù)高氧暴露14天時，高氧組胞核著色仍持續(xù)強(qiáng)于空氣組及空氣+MK-801組(P均<0.01)，MK-801可減輕不同高氧暴露時