含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HepG2后的作用機(jī)制研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HepG2后的作用機(jī)制研究姓名：陳永安申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師：凌昌全20090501第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒感染復(fù)數(shù)在MOI=25以上能夠顯著誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡，凋亡率隨時(shí)間及感染復(fù)數(shù)的增加而逐漸增加，呈時(shí)間劑量依賴性(8h、12h、24h、72h)。3羅丹明123、PI雙染色法，F(xiàn)CM檢測細(xì)胞線粒體膜電

2、位顯示12h開始，隨著病毒感染指數(shù)的增高和時(shí)間的延長，線粒體膜電位逐漸降低，各AdrAFP—Mel轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組及AdrAFP轉(zhuǎn)染組問比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。4Fura2染色FCM檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度顯示8h開始，隨著病毒感染指數(shù)的增高和時(shí)間的延長，細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，各Ad—rAFP—Mel轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組及AdrAFP轉(zhuǎn)染組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。5Westemblot檢測顯示MOI=400濃

3、度含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒作用8h細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋I蘭tcaspase9、3開始活化，24h內(nèi)逐漸明顯，72h仍有活化，caspasel2未見明顯活化。結(jié)論：1含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒能夠抑制HepG2細(xì)胞的生長，細(xì)胞死亡呈現(xiàn)壞死與凋亡兼有的特征。2含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒能夠使HepG2細(xì)胞線粒體膜電位下降，細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度升高，其作用可能與影響細(xì)胞生物膜結(jié)構(gòu)有關(guān)。3含rAFP的蜂毒素基因重組腺病毒能夠上調(diào)細(xì)胞凋