大興安嶺野生藍(lán)莓菌根真菌分離及定殖分析.pdf

1、與自然界中絕大多數(shù)植物相似，藍(lán)莓的根系中也存在著菌根真菌共生，這類菌根屬杜鵑花類菌根（Ericoid mycorrhizal，ERM）。菌根對(duì)藍(lán)莓植株的營養(yǎng)吸收、抗病性、抗逆性有很大的改善作用，其生物學(xué)促生功能極為重要。本研究對(duì)大興安嶺地區(qū)野生藍(lán)莓菌根真菌進(jìn)行了分離、鑒定，并利用原位PCR技術(shù)分析菌根真菌在藍(lán)莓植株根系的定殖情況。通過對(duì)大興安嶺地區(qū)野生藍(lán)莓菌根真菌主要類群及其定殖情況的了解，可以為優(yōu)良菌劑的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)大興安嶺

2、地區(qū)野生藍(lán)莓引種栽培及繁育，同時(shí)也對(duì)菌根技術(shù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用具有重要的意義。結(jié)果如下：
　　(1)以大興安嶺野生藍(lán)莓須根為實(shí)驗(yàn)材料，利用馬丁—孟加拉紅(MA)培養(yǎng)基、MMN培養(yǎng)基分離了139株真菌，經(jīng)菌落形態(tài)結(jié)合分子生物學(xué)方法鑒定后分類結(jié)果如下：Oidiodendron、Crypyosporiopsis、Phialocephale、Lachnum、Yarrowia lipolytica、Chaetomium globosum、S

3、ordariomycetes sp.、Mucoromycotina sp.。
　　(2)以質(zhì)粒pCAMBIA1300為骨架，將質(zhì)粒pCT74上的增強(qiáng)型GFP表達(dá)盒克隆到該質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)區(qū)(multiple cloning site，MCS)，將質(zhì)粒pCT74上的真菌潮霉素抗性基因(hygromycin resisitant gene，HYG)表達(dá)盒克隆替換pCAMBIA1300原有的HYG表達(dá)盒，成功構(gòu)建了表達(dá)載體pXBtCEH

4、-GFP。
　　(3)利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法(agrobacterium tumefaciens-mediated transformation，ATMT)成功使GFP基因在兩種藍(lán)莓內(nèi)生真菌Crypyosporiopsis ericae、Sordariomycetessp.的菌絲體內(nèi)表達(dá)，通過熒光顯微鏡成功觀察到了熒光菌絲形態(tài)，轉(zhuǎn)化子經(jīng)五代培養(yǎng)后熒光活性穩(wěn)定，通過PCR成功從轉(zhuǎn)化子基因組中得到GFP標(biāo)記片段。
　　(4)以經(jīng)菌