腦膠質(zhì)瘤組織中解旋酶RECQ1表達(dá)與PCNA表達(dá)相關(guān)性分析.pdf

1、目的:人腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤，手術(shù)難以根除，對(duì)放、化療不敏感，因此如何有效的控制甚至治愈膠質(zhì)瘤仍是亟待解決的難題，文獻(xiàn)報(bào)道，WHO分級(jí)3級(jí)的膠質(zhì)瘤患者平均生存期約3-5年，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者平均生存期不足1年，尋找膠質(zhì)瘤治療新靶點(diǎn)及調(diào)整治療策略，是我們當(dāng)前亟待解決的難題。因此明確膠質(zhì)瘤致病機(jī)理，進(jìn)一步篩選高效特異性的治療靶點(diǎn)尤為重要。而隨著基因技術(shù)的不斷深入研究，如何能利用基因有效治療膠質(zhì)瘤成為研究熱點(diǎn)。
　　解旋

2、酶是一類能解開核苷酸雙鏈的酶，它廣泛存在于多種生物體中，參與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄重組以及RNA接拼、核糖體組裝、蛋白質(zhì)翻譯，端粒穩(wěn)定。最近研究表明，解旋酶第二大家族中的RECQ解旋酶亞家族在核酸代謝過(guò)程中起關(guān)鍵作用。研究表明RECQ1對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖作用主要與其能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞DNA修復(fù)有關(guān)。
　　增殖細(xì)胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PCNA)在腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)能夠反

3、應(yīng)膠質(zhì)瘤惡性程度及膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力，常用于膠質(zhì)瘤患者預(yù)后評(píng)估。
　　探討解旋酶RECQ1在不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)情況，對(duì)于腦膠質(zhì)瘤發(fā)生進(jìn)展過(guò)程中核酸代謝特點(diǎn)進(jìn)行初步探討，明確PCNA對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后評(píng)估。對(duì)RECQ1和PCNA二者在膠質(zhì)瘤細(xì)胞瘤增殖方面的內(nèi)在聯(lián)系做出初步推測(cè)，為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后評(píng)估及進(jìn)一步放、化療及基因治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科及保定市第一醫(yī)院神經(jīng)外科201

4、2年11月-2013年10月期間83例經(jīng)手術(shù)中切除并獲的新鮮人腦膠質(zhì)瘤組織及18例正常人腦組織，正常人腦組織取自急癥行顱腦外傷內(nèi)減壓術(shù)患者。所取的腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)兩名以上神經(jīng)病理醫(yī)師進(jìn)行診斷并確診。83例患者，包括男性47例，女性36例。其中低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO分級(jí)1-2級(jí)）35例，高級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO分級(jí)3-4級(jí)）48例。腫瘤位于大腦半球74例，小腦4例，丘腦3例，第三腦室1例，腦干1例。單發(fā)80例，多發(fā)3例。所有患者術(shù)前均無(wú)未接受放、

5、化療和免疫治療史;標(biāo)本取材后，生理鹽水去除血漬，首先將部分投至液氮中速凍，進(jìn)行半定量PCR檢測(cè)，另一部分標(biāo)本用10％甲醛固定，石蠟包埋，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。同時(shí)記錄患者性別、年齡，病理級(jí)別。
　　2應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組標(biāo)本RECQ1和PCNA表達(dá)進(jìn)行分析。
　　3同時(shí)對(duì)術(shù)中所取的新鮮膠質(zhì)瘤組織運(yùn)用液氮保存，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chine

6、 reaction，RT-PCR)方法檢測(cè)各組標(biāo)本RECQ1 mRNA的表達(dá)。
　　4應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間比較采取x2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1 RECQ1免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:RECQ1蛋白著色于膠質(zhì)瘤細(xì)胞細(xì)胞核。所有級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為56.6％(47/83)，對(duì)照組18例正常腦組織中RECQ1均呈陰性表達(dá)，在高級(jí)別膠質(zhì)瘤組陽(yáng)性表達(dá)率72

7、.9％(35/48)，而在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組其陽(yáng)性表達(dá)率為34.3％(12/35)，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組RECQ1表達(dá)高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2 PCNA免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞核，在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.7％(67/83)，并且隨膠質(zhì)細(xì)胞瘤病理級(jí)別的增高而表達(dá)增高，而在正常腦組織中呈陰性表達(dá)。
　　3半定量-PCR研究結(jié)果:RECQ1 mRNA在正常腦組織、低級(jí)別膠質(zhì)瘤組及

8、高級(jí)別膠質(zhì)瘤組中相對(duì)表達(dá)量分別為0.37±0.02，1.05±0.08和2.22±0.14，RECQ1在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤，二者均高于正常腦組織中表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中RECQ1表達(dá)高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組，在正常腦組織中不表達(dá)。
　　2 RECQ1 mRNA在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中含量高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組，在正常腦組織中呈低表達(dá)。