Notch1-Jagged1信號對人肝癌SMMC 7721細胞增殖和侵襲的影響及其作用機制.pdf

1、目的:以細胞培養(yǎng)技術(shù)為基礎(chǔ),檢測在Notch信號通路的激活和失活狀態(tài)下人肝癌細胞株SMMC7721增殖和侵襲等一系列生物學行為的變化。在不同的Notch信號通路活化狀態(tài)下檢測Bcl-2、Snail等基因mRNA的表達情況,初步探討其生物學行為變化的可能機制,進一步拓寬肝癌的發(fā)病機理。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌SMMC7721細胞,至對數(shù)生長期,利用RT-PCR技術(shù)檢測細胞中Notch信號通路各組分的表達情況,了解Notch信號通路

2、在該細胞系中的活化狀態(tài)。進而將細胞進行分組:①激活劑組(向細胞中加入Notch信號通路特異性激活劑Jagged1蛋白),②抑制劑組(向細胞中加入Notch信號通路特異性抑制劑DAPT)③空白對照組(只加入PBS液)。MTT法和軟瓊脂集落形成試驗檢測各組細胞增殖的情況,Transwell小室法觀察細胞侵襲的能力,RT-PCR檢測各組細胞中Hes-1、Bcl-2及Snail基因mRNA的表達。
　　結(jié)果:①SMMC7721細胞中存在N

3、otch1/Jagged1信號系統(tǒng)的表達,培養(yǎng)12、24、36、48h后,激活劑組細胞A值分別為0.809±0.032、0.543±0.016、0.466±0.031、0.376±0.009,空白對照組分別為0.952±0.024、1.119±0.064、1.457±0.028、1.539±0.022,抑制劑組分別為1.063±0.071、1.452±0.022、1.687±0.017、1.814±0.032。激活劑組、抑制劑組與對照組

4、比較,P均<0.05。②激活劑組、空白對照組、抑制劑組的體外細胞克隆形成數(shù)分別為17.4±6.3、26.0±3.4和43.2±7.3,激活劑組、抑制劑組與對照組比較,P均<0.05。③激活劑組、空白對照組和抑制劑組的細胞侵襲數(shù)分別為43.8±6.8、64.6±5.6和90.0±6.9(P<0.05)。④激活劑組細胞中Hes-1基因的表達增強,Bcl-2及Snail基因的表達顯著降低;相反,抑制劑組細胞的Hes-1基因表達降低,Bcl-2