十種中藥植物雌激素樣作用及其機制的研究.pdf

1、雌激素(estrogen)是女性體內(nèi)關鍵性的調(diào)節(jié)激素，不僅對女性生殖系統(tǒng)的生長、發(fā)育、分化有重要的調(diào)控作用，而且對骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能也有重要影響。女性進入絕經(jīng)期后，隨著卵巢功能的衰退和體內(nèi)雌激素水平的下降，女性將出現(xiàn)更年期綜合征，骨質(zhì)疏松、心血管疾病、老年性癡呆等疾病的發(fā)病率也隨之上升；而雌激素替代療法(estrogen replacement therapy,ERT)雖然可明顯緩解上述更年期癥狀，但長期應用雌

2、激素易產(chǎn)生高血凝狀態(tài)、高血壓、水腫、癡呆等副作用，并增加乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的發(fā)病危險。因此，人們一直致力于尋求雌激素替代物，期望這種替代物既能發(fā)揮雌激素對心腦血管等系統(tǒng)的保護作用，緩解更年期綜合癥；同時又能避免上述副作用，植物雌激素(phytoestrogen)正是其中的重要一類。 植物雌激素是天然存在于一些植物中、具有雌激素效能的化合物。因與雌激素結(jié)構(gòu)類似，這些化合物可以與體內(nèi)雌激素受體(estrogen recep

3、tor,ER)結(jié)合并顯示雌激素樣活性。植物雌激素在體內(nèi)具有雙向調(diào)節(jié)作用：在體內(nèi)雌激素水平較低時有擬雌激素作用；當體內(nèi)雌激素水平較高時可發(fā)揮抗雌激素活性。因此，近年來植物雌激素又被稱為“選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑”(selective estrogen receptor modulators，SERMs)。 長期以來，許多中草藥植物被廣泛應用于婦女保健和婦科病癥的治療，這些中藥所含的植物雌激素在其中發(fā)揮的藥效作用不容忽視。在含有植物雌

4、激素成分的中藥中，活血化瘀類和補益類中藥居各類中藥的前二位。本研究選取了其中的十種中藥及其所含的部分活性成分作為研究對象，利用整體動物實驗、體外細胞培養(yǎng)并結(jié)合報告基因檢測技術(shù)觀察比較了它們的植物雌激素樣作用，探討了其可能的作用機制及其影響因素；為婦科臨床用藥提供實驗基礎，為更年期婦女保健提供理論依據(jù)。 1、利用小鼠子宮增重法對十種婦科常用中藥(川牛膝、紅花、丹參、女貞子、枸杞、甘草、肉蓯蓉、淫羊藿、補骨脂和菟絲子)進行雌激素樣作

5、用的篩選 通過觀察用藥前后小鼠子宮系數(shù)和體重變化情況，評價淫羊藿等十種中藥的雌激素樣作用；并利用Elisa法測定血清E<,2>、FSH、LH水平的變化，免疫組化法檢測小鼠子宮組織ERα和ERβ的表達情況。 2、MCF7細胞增殖實驗評價紅花等十種中藥的植物雌激素活性 利用ER陽性MCF7細胞，單獨灌胃中藥免煎劑或同時灌胃己烯雌酚和中藥免煎劑，以MTT法檢測紅花、川牛膝、丹參、女貞子、枸杞、甘草、肉蓯蓉、淫羊藿、補骨

6、脂、菟絲子等十味中藥含藥血清對細胞增殖的影響；評價十味中藥的植物雌激素活性。結(jié)果：紅花、川牛膝、丹參、枸杞、肉蓯蓉、淫羊藿、補骨脂和菟絲子等中藥含藥血清可顯著促進MCF7細胞增殖；而女貞子組可見細胞增殖受到明顯抑制。在拮抗實驗中，紅花、川牛膝、丹參、甘草、淫羊藿、補骨脂和菟絲子組可見己烯雌酚促細胞增殖的作用受到了顯著抑制；而肉蓯蓉可協(xié)同并顯著增強己烯雌酚促細胞增殖的作用。 3、補骨脂等五種中藥植物雌激素活性的實驗研究 利

7、用大鼠子宮增重實驗及檢測含藥血清影響ER陽性MCF7細胞增殖的方法評價五種中藥的植物雌激素活性。 4、四種中藥和六種中藥活性成分植物雌激素作用的比較研究 采用MTT細胞增殖實驗觀察四種中藥：川牛膝、紅花、丹參、補骨脂及其所含六種活性成分：蛻皮甾酮、紅花黃色素A、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、補骨脂素、異補骨脂素對雌激素受體陽性細胞MCF7增殖的影響，并以雌激素受體拮抗劑ICl182,780干預，探討其發(fā)揮雌激素樣作用的可能機制。

8、 5、異補骨脂素和蛻皮甾酮對人乳腺癌T47D細胞增殖及ER亞型、pS2、PR表達的影響利用人乳腺癌T47D細胞觀察異補骨脂素和蛻皮甾酮對雌激素受體陽性細胞T47D增殖的作用，并檢測其對T47D細胞雌激素受體亞型ER-α、ER-β和雌激素效應基因pS2及PR表達的影響。 6、補骨脂素的植物雌激素作用及其機制的探討 利用人乳腺癌T47D細胞觀察補骨脂素的雌激素樣作用，并探討其可能的作用機制。具體方法為：利用MTT細胞

9、增殖實驗觀察補骨脂素對ERα、ERβ陽性細胞T47D增殖的影響：以半定量RT-PCR法檢測其對該細胞雌激素效應基因：孕激素受體(PR)mRNA表達情況的影響。同時，以雌激素受體拮抗劑IC1182，780為工具藥進行干預；并通過流式細胞術(shù)檢測細胞ERα、ERβ、PR含量的變化。 7、基于報告基因方法對中藥活性成分植物雌激素作用的比較研究 通過重組熒光素酶報告基因技術(shù)比較研究蛻皮甾酮、補骨脂素、異補骨脂素的植物雌激素作用及其

10、可能機制。 結(jié)論: l、整體動物實驗結(jié)果顯示：實驗檢測的十種中藥均具有一定的植物雌激素活性或搞雌激素活性；但其作用靶器官、作用強度和途徑有所差異。 2、對藥物血清的雌激素活性進行檢測時發(fā)現(xiàn)：紅花、川牛膝、丹參、淫羊藿、補骨脂、菟絲子等六種中藥在單獨用藥時均表現(xiàn)出擬雌激素作用，在與雌激素同時用藥時表現(xiàn)抗雌激素作用；其雙向調(diào)節(jié)效應依賴于體內(nèi)雌激素水平的高低。 3、中藥川牛膝、紅花、補骨脂、丹參及其活性成分：蛻

11、皮甾酮、紅花黃色素A、補骨脂素、異補骨脂素能夠促進ER(+)MCF7細胞增殖，而丹參的兩種活性成分：丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA可抑制MCF7細胞增殖，其作用均是通過ER介導的。 4、異補骨脂素和蛻皮甾酮可促進ER(+)T47D細胞增殖，并可影響靶細胞ER亞型、pS2的mRNA表達水平和ER亞型、PR蛋白的表達；異補骨脂素和蛻皮甾酮具有植物雌激素作用。 5、補骨脂素可促進ER(+)T47D細胞增殖，增強ER亞型和PR的表達，且其