放射性核素標(biāo)記胰腺癌靶向藥物的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分放射性核素<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物的實(shí)驗(yàn)研究 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1與胰腺癌等多種腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系。胰腺癌等細(xì)胞膜表面有高表達(dá)的胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體，胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的類似物能與腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體結(jié)合，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。用<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的類似物有希望作為具有實(shí)用價(jià)值的胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體的顯像劑，可以對(duì)直腸癌、胰腺癌等多

2、種腫瘤做早期的診斷。 目的：建立<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物的方法學(xué)，研究胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體的顯像。 方法：(1)通過(guò)預(yù)錫化法標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物，改變標(biāo)記條件：①Tween 80的用量從0～10μL；②分別在5 min、10min、15 min、30min、1h、2h、4h、6h不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定標(biāo)記率；③SnCl<,2>·2H<,2>O濃度從0.75～4g/L；④IGF-1A的用量從20

3、～100μg；⑤淋洗液的體積從10～200μL。 (2)用<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物，取不同濃度梯度的人胰腺癌細(xì)胞8988(1×10<'8>個(gè)/mL、5×10<'7>個(gè)/mL、1×10<'7>個(gè)/mL、5×10<'6>個(gè)/mL、1×10<'6>個(gè)/mL)分別進(jìn)行特異與非特異結(jié)合反應(yīng)。取25只正常的裸鼠分別做5 min，30min，1h，2h，4h的體內(nèi)分布研究。另取25只裸鼠在注射入人胰腺癌細(xì)胞后8周，注

4、射部位腫瘤長(zhǎng)至約2cm<'3>，尾靜脈注入<'99>Tc<'m>標(biāo)記的胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物后分別在15min，30min，1h，2h，4h，6h，7h對(duì)荷胰腺癌裸鼠進(jìn)行放射受體顯像研究以及5min，30min，1h，2h，4h在荷胰腺癌裸鼠體內(nèi)的分布研究。 結(jié)果：(1)<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物最高標(biāo)記率為(94.43±0.75)％，膠體含量為(3.47±0.71)％。改變標(biāo)記條件：①隨著吐溫80的用

5、量的降低，標(biāo)記率會(huì)逐漸的增高，最高標(biāo)記率為(92.00±1.35)％。但若在反應(yīng)體系中不添加吐溫80,標(biāo)記率有明顯的下降；②標(biāo)記反應(yīng)在15min的標(biāo)記率已達(dá)(91.93±2.89)％，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)標(biāo)記率無(wú)明顯變化；③減少SnCl<,2>2H<,2>O用量，標(biāo)記率明顯下降，當(dāng)SnCl<,2>·2H<,2>O的量為3 g/L時(shí)標(biāo)記率為(91.90±1.15)％；④標(biāo)記率隨胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物用量的增加而增高，最高標(biāo)記率達(dá)(92.77±

6、0.99)％；⑤<'99>Tc<'m> O<,4><'->淋洗液體積為50μL最高標(biāo)記率達(dá)(93.43±0.55)％。 (2)<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物后，與人胰腺癌細(xì)胞8988的結(jié)合率分別為19.65％、19.35％、19.26％、17.03％、14.72％；尾靜脈注入<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物后對(duì)裸鼠進(jìn)行放射受體顯像研究，結(jié)果表明15min之后腫瘤部位放射性物質(zhì)濃聚逐漸增高，腫

7、瘤組織放射性強(qiáng)度百分比與肌肉、血液等其它非腫瘤組織放射性強(qiáng)度百分比的比值(T/NT)逐漸升高。 結(jié)論：<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物后可以與胰腺癌細(xì)胞特異結(jié)合。<'99>Tc<'m>標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子1類似物在荷人胰腺癌裸鼠體內(nèi)顯像結(jié)果表明其能與胰腺癌組織特異性結(jié)合，在胰腺癌的診斷方面有著良好的應(yīng)用前景。 第二部分放射性核素<'188>Re標(biāo)記抗人胰腺癌單克隆抗體的方法學(xué)研究 目的：探索建立

8、<'188>Re標(biāo)記抗人胰腺癌單克隆抗體2F4-2C<,9>的方法，探討<'188>Re-2F4-2 C<,9>在胰腺癌的治療中應(yīng)用的可行性。 方法：<'188>Re標(biāo)記抗人胰腺癌單克隆抗體2F4-2C<,9>采用直接還原法，改變標(biāo)記條件：①SnCl<,2>·2H<,2>O濃度從12～20g/L；②分別在30min、1h、、2h、3h、5h、7h不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定標(biāo)記率；③淋洗液的體積從50～250μL； 結(jié)果：(1)塑料管

9、中加入0.2mol/LpH值為6.0的乙酸緩沖液200μL，然后加抗人胰腺癌單抗2F4-2 C<,9> 100μL(0.6g/L)，用0.3mol/L葡萄糖酸鈉稀釋40μL濃鹽酸溶解的200μL Sncl<,2>．2H<,2>O(20g/L)中加入<'188>ReO<,4><'->淋洗液100μL，搖勻后室溫放置1小時(shí)，二者混合反應(yīng)后用Sephadex G25層析柱進(jìn)行純化分離。 (2)<'188>Re標(biāo)記抗人胰腺癌單克隆抗體2

10、F4-2 C<,9>：<'188>Re-2F4-2 C<,9>的標(biāo)記率為66～75％。經(jīng)Sephadex G25純化后放化純度為85～88％。改變標(biāo)記條件：①當(dāng)氯化亞錫的濃度為20g/L，標(biāo)記率最高為(70.70±1.76)％；②隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，標(biāo)記率增高，標(biāo)記率最高為(71.57±0.91)％；③淋洗液的體積為100μL時(shí)，<'188>Re標(biāo)記2F4-2 C<,9>標(biāo)記率為(70.95±1.94)％。 結(jié)論：直接還原法，標(biāo)記