華中五味子酮對Alzheimer病樣大鼠腦組織蛋白熱穩(wěn)定性及IL-6表達(dá)的影響.pdf

1、背景：阿爾茨海默病(AD)是老年期癡呆最常見的類型,是一種以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,具有較高的致殘性。其患病率隨年齡增長而上升,因此,隨著人類平均壽命延長和人口老齡化的出現(xiàn),AD對人類健康的危害變得日益突出,已成為當(dāng)前老年醫(yī)學(xué)面臨的最為嚴(yán)峻的問題之一。 白細(xì)胞介素6(IL-6)是AD發(fā)病過程中的重要細(xì)胞因子,越來越多的證據(jù)表明IL-6在AD炎癥反應(yīng)機制中起重要作用。 華中五味子酮(sc

2、hisandrone)是從傳統(tǒng)中藥華中五味子中分離得到的一種具有4-苯代四氫萘骨架的木脂素。因其具有強的抗氧化及抗炎活性,近年被應(yīng)用于防治AD的研究。 目的：本研究在體內(nèi)條件下模擬AD的基本病理改變,用五味子酮進(jìn)行干預(yù),測試大鼠在Morris水迷宮中的逃避潛伏期,并用ELISA方法檢測大鼠腦組織內(nèi)IL-6的表達(dá),同時觀察五味子酮對β-淀粉樣蛋白(Aβ)誘導(dǎo)的AD模型大鼠腦組織蛋白穩(wěn)定性的影響。在本研究基礎(chǔ)上,探討五味子酮改善AD

3、模型大鼠認(rèn)知能力的可能機理,以期為將來臨床應(yīng)用華中五味子酮防治AD提供部分實驗室依據(jù)。 方法：本研究主要涉及的實驗技術(shù):Morris水迷宮、灌胃術(shù)、側(cè)腦室定向注射術(shù)、分光光度計比色法、雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。 將50只大鼠進(jìn)行水迷宮實驗。從水迷宮平均逃避潛伏期無明顯延長的大鼠中隨機選擇36只進(jìn)入下一步實驗,隨機分為3組,每組12只：(1)空白對照組：大鼠予玉米油灌胃14d,方法為用灌胃針將2ml玉米油灌

4、入大鼠胃內(nèi),1次/d,第15天側(cè)腦室內(nèi)注射無菌生理鹽水5μl,再繼續(xù)用玉米油灌胃14d；(2)AD模型組：大鼠予玉米油灌胃14d,方法同上,第15天側(cè)腦室內(nèi)注射51xl配制的Ap溶液(將Aβ25-35溶于無菌生理鹽水,濃度10mmol/L,置37℃恒溫箱內(nèi)孵育3d后備用),再繼續(xù)用玉米油灌胃14d；(3)華中五味子酮干預(yù)組：大鼠予含華中五味子酮的玉米油(將華中五味子酮溶于玉米油,濃度2 mmol/L)灌胃14d,方法同上,第15天側(cè)腦室

5、內(nèi)注射前述Aβ溶液5μl,再繼續(xù)用含華中五味子酮的玉米油灌胃14d。 利用Morris水迷宮測試大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,利用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定大鼠腦組織中IL-6的水平。 取部分大鼠腦組織,提取蛋白,進(jìn)行熱穩(wěn)定學(xué)實驗,用全波長比色儀檢測各組蛋白在固定溫度(水浴箱,55℃)下,隨時間改變的340nm處的吸光度(OD)值。 結(jié)果： 1、大鼠3天的平均逃避潛伏期分別為(單位：秒)：對照組：36.38

6、±12.56、23.92±8.27、16.12±7.78;模型組：49.03±8.06、38.23±10.35、31.52±10.06;藥物組：44.19±11.55、30.02±9.04、22.54±7.79。統(tǒng)計分析結(jié)果：模型組的逃避潛伏期較對照組延長。藥物組與模型組比較,從第2天開始其逃避潛伏期縮短。藥物組和對照組之間的逃避潛伏期比較,逃避潛伏期均延長,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 2、IL-6水平(單位pg/ml)：對照組：20

7、.95±5.97；模型組：40.99±12.85；藥物組：30.38±10.05。統(tǒng)計分析示：模型組IL-6水平較對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；藥物組IL-6水平較對照組降低,但較模型組增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 3、各組大鼠腦組織蛋白的熱穩(wěn)定性：在340nm處,隨加熱時間延長(55℃,恒溫),AD組模型組OD值增高速度明顯超過藥物干預(yù)組和對照組；藥物干預(yù)組OD值增高速度快于對照組。 結(jié)論：側(cè)腦室定向注射Aβ25-35對