HCPT脂質(zhì)體經(jīng)導管動脈內(nèi)注射的藥代動力學實驗研究.pdf

1、目的:①建立以高效液相色譜(HPLC)-熒光檢測法測定日本大白兔血漿及肝臟組織中羥基喜樹堿(HCPT)濃度的方法。
　　②對比研究經(jīng)靜脈注射HCPT溶液或HCPT脂質(zhì)體后日本大白兔血漿中藥物濃度隨時間變化的趨勢及藥代動力學參數(shù)。
　　③采用不同介入方法經(jīng)導管兔肝動脈內(nèi)引入HCPT溶液或HCPT脂質(zhì)體,比較在兔VX2肝癌模型腫瘤中心及周邊組織中的藥物濃度及藥物持續(xù)時間,從而針對肝癌的治療優(yōu)選一種經(jīng)導管動脈給藥的方法。
　

2、　方法:①采用HPLC-熒光檢測法,檢測器激發(fā)波長為360nm,發(fā)射波長為580nm,色譜柱為WatersSymmetryC18柱(5μm,3.9×150mm),預柱為ShimadzuWondasilC18柱(5μm,4.0×10mm),流動相為乙腈:0.15mM醋酸銨(PH6.5)緩沖液(30:70,v/v),流速為1ml/min,采用內(nèi)標法測定血漿及組織中的藥物濃度。
　?、谌?只日本大白兔,以有效藥物濃度為1mg/kg經(jīng)耳緣

3、靜脈分別注射HPCT溶液或HCPT脂質(zhì)體,分別于給藥后2,5,10,15,30,45,60,90,120,180,240分鐘各取血并檢測血藥濃度,采用3P87藥代動力學計算程序進行房室模型擬合,比較靜脈注射兩種藥物劑型在日本大白兔血漿中藥物濃度隨時間變化的趨勢及相關(guān)藥代動力學參數(shù)。
　?、劢⑼肰X2肝癌動物模型,MRI掃描檢查腫瘤種植情況及生長狀況,將60只荷瘤兔隨機分成4組,采用4種不同的介入方法經(jīng)導管肝動脈內(nèi)引入HCPT溶液

4、或HCPT脂質(zhì)體,A組:HCPT脂質(zhì)體與碘油混懸后經(jīng)導管動脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導管動脈栓塞;B組:HCPT脂質(zhì)體經(jīng)導管動脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導管動脈栓塞;C組:HCPT溶液與碘油混懸后經(jīng)導管動脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導管動脈栓塞;D組:HCPT溶液經(jīng)導管動脈灌注+聚乙烯醇(PVA)。于給藥后6小時、1天、3天、6天、10天處死實驗兔并檢測肝臟腫瘤中心及周邊組織中HCPT的濃度。
　　結(jié)果:(1)日本大白兔血漿及

5、肝臟組織中HCPT峰與內(nèi)標喜樹堿(CPT)峰分離良好,內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品峰,HCPT保留時間為2.4min,內(nèi)標物(CPT)保留時間為4.8min。兔血漿及肝臟組織中HCPT在濃度0.2-20μg/ml及1-200ng/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999。血漿中HCPT的提取回收率為94.68％-103.60%,日間與日內(nèi)變異均小于10%,肝臟組織中HCPT的提取回收率為96.68%-117.00%,日間與日內(nèi)變異均小

6、于10%,最低檢測濃度為0.5ng/ml。
　　(2)注射HCPT溶液及HCPT脂質(zhì)體符合權(quán)重為1/C/C的三室模型。HCPT溶液靜脈注射后在實驗兔體內(nèi)代謝速度快,其分布半衰期t1/2α為9.1348min,消除半衰期t1/2β為25.2492min,而HCPT脂質(zhì)體的分布半衰期t1/2α為18.7772min,消除半衰期t1/2β為136.248min,明顯高于HCPT溶液組,HCPT脂質(zhì)體AUC大于HCPT溶液AUC,HCPT

7、脂質(zhì)體CL低于HCPT溶液CL,HCPT脂質(zhì)體Vc小于HCPT溶液Vc。
　　(3)在介入處理后腫瘤組織中心及周邊組織中HCPT的濃度隨著時間逐漸減少。組間同一時間點同一部位的HCPT濃度比較:介入處理6小時后取出的標本中,腫瘤中心及周邊組織中HCPT濃度均為A組>C組>D組、B組>C組>D組(P<0.05),A組與B組組間無統(tǒng)計學差異;1天后取出的標本中,D組腫瘤中心及周邊組織中HCPT的濃度低于最低檢測限無法測得,腫瘤中心及周

8、邊組織的HCPT濃度均為A組>C組、B組>C組(P<0.05),A組與B組組間無統(tǒng)計學差異;3天后取出的標本中,D組腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度低于最低檢測限無法測得,腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度均為A組>B組>C組(P<0.05);7天后取出的標本中,C組和D組腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度低于最低檢測限無法測得,腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度均為A組>B組(P<0.05);10天后取出的所有標本中HCPT濃度均低

9、于最低檢測限無法測得。
　　組內(nèi)同一時間點不同部位的HCPT濃度比較:介入處理6小時后取出的標本中,4個組的腫瘤中心的HCPT濃度均高于腫瘤周邊組織,其中B組和D組有統(tǒng)計學差異,A組和C組無統(tǒng)計學差異;1天后取出的標本中,比較A、B、C三個組均為腫瘤周邊組織的HCPT濃度高于腫瘤中心,均無顯著性差異;3天后取出的標本中,比較A、B、C三個組,結(jié)果均顯示腫瘤周邊組織的HCPT濃度均高于腫瘤中心,均無顯著性差異;7天后取出的標本中,比

10、較A、B兩個組,腫瘤周邊組織的HCPT濃度均高于腫瘤中心,也均無顯著性差異。
　　結(jié)論:(1)本實驗所采用的高效液相色譜-熒光檢測法可以用于日本大白兔血漿及肝臟中羥基喜樹堿藥物含量的檢測,檢驗結(jié)果可靠。
　　(2)HCPT脂質(zhì)體較HCPT溶液無論是在兔血漿中還是在肝臟腫瘤中心及周邊組織中都有更強的緩釋作用,能夠維持更長時間。
　　(3)在經(jīng)導管動脈內(nèi)化療栓塞時,HCPT脂質(zhì)體與碘油混懸后經(jīng)導管動脈灌注+聚乙烯醇(PVA