黃芪多糖對孕早期蛻膜Toll樣受體表達(dá)與功能的影響.pdf

1、Toll樣受體(Toll like receptor，TLR)是近年來在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種Ⅰ型跨膜受體，可以識別保守的病原體相關(guān)分子模式(PAMP)感知病原微生物的存在，通過細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)細(xì)胞合成分泌各種細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-6等，啟動機(jī)體先天性免疫應(yīng)答。TLR廣泛地分布于人體各類腔道組織細(xì)胞，如呼吸道、腸道等。在生殖道各類細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)有TLR的表達(dá)，提示TLR可能參與了母胎免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)。黃芪多糖是一種可以調(diào)節(jié)TNF-α、I

2、L-6分泌的中藥，但機(jī)制不明。我們設(shè)計了體外試驗(yàn)，觀察黃芪多糖通過孕早期蛻膜細(xì)胞TLR途徑對TNF-α、IL-6分泌的影響。
　　 目的：觀察黃芪多糖通過孕早期蛻膜TLR途徑對IL-6、TNF-α分泌的影響。
　　 方法：⑴采用RT-PCR方法檢測孕早期蛻膜TLR4、TLR9mRNA的表達(dá)。⑵取孕早期蛻膜進(jìn)行原代培養(yǎng)，分為三組，PBS對照組、LPS刺激組和CPG-ODN刺激組，用0mg/L、25mg/L、50mg/L、1

3、25mg/L、250mg/L黃芪多糖作用三組蛻膜細(xì)胞48小時，再分別用PBS、LPS和CPG-ODN分別處理24小時，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法檢測上清液TNF-α、IL-6的分泌，用流式細(xì)胞儀檢測蛻膜細(xì)胞TLR4、TLR9的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①通過RT-PCR方法發(fā)現(xiàn)孕早期蛻膜表達(dá)TLR4、TLR9mRNA。②孕早期蛻膜原代培養(yǎng)，光鏡下細(xì)胞呈梭形或多角形，核大而圓，位于細(xì)胞中央。胎盤泌乳素免疫組織化學(xué)染色，95％細(xì)胞呈陽性。③

4、③用LPS刺激細(xì)胞后，TLR4表達(dá)上調(diào)，用25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖預(yù)處理蛻膜細(xì)胞48小時后，250mg/L黃芪多糖可以抑制TLR4表達(dá)的上調(diào)，但25mg/L、50mg/L、125mg/L黃芪多糖不能抑制LPS刺激引起的TLR4表達(dá)的上調(diào)；用CPG-ODN刺激蛻膜細(xì)胞，TLR9表達(dá)上調(diào)，用25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖預(yù)處理蛻膜細(xì)胞48小時后，TLR9表達(dá)無顯著

5、性變化。④用LPS刺激細(xì)胞后，IL-6、TNF-α的分泌顯著增加，用25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖預(yù)處理蛻膜細(xì)胞48小時，250mg/L黃芪多糖可以抑制LPS刺激蛻膜細(xì)胞引起TNF-α分泌的增加，25mg/L、50mg/L、125mg/L黃芪多糖無此作用，但25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖均可以引起IL-6分泌的增加。用CPG-ODN刺激蛻膜細(xì)胞，IL-6分泌顯著增加

6、，但TNF-α分泌無顯著性變化，25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖對CPG-ODN刺激蛻膜細(xì)胞引起IL-6分泌增加無顯著影響，TNF-α分泌也無顯著變化。⑤25mg/L、50mg/L、125mg/L、250mg/L黃芪多糖作用蛻膜細(xì)胞前后，蛻膜TLR4、TLR9的表達(dá)及IL-6、TNF-α的分泌無顯著性變化。
　　 結(jié)論：Toll樣受體功能性表達(dá)于孕早期蛻膜，配體刺激后，TLR4、TLR9介導(dǎo)蛻膜