銀杏內(nèi)酯B，α-玉米赤霉醇對(duì)TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的過度產(chǎn)生或與其清除防御機(jī)制的失衡能夠?qū)е卵趸瘧?yīng)激，損害血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，甚至導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死。動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等心血管疾病的許多致病因素/因子，如腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor,TNFα)、血管緊張素Ⅱ等，都具有刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ROS的能力，并通過ROS激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制和基因表達(dá)，在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用；而抗氧化藥物能夠降低或

2、消除氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，對(duì)心血管疾病具有預(yù)防和治療的潛能。銀杏抽提物早就被用于中風(fēng)等缺血性疾病的治療，有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化的作用，但對(duì)粥樣硬化血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用和機(jī)制了解較少[5]。植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-zearalanol，α-ZAL)能明顯抑制切除卵巢家兔喂食高膽固醇后動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，并使其病理變化顯著減輕[19]，最近的研究顯示，它能改善ox-LDL刺激下的內(nèi)皮細(xì)胞功能[20]，但其作用機(jī)制

3、還很不清楚。 本研究觀察銀杏內(nèi)酯B(ginkgobiloba，GB)和α-ZAL對(duì)TNFα刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)功能的影響，探討其作用機(jī)制，為今后合理的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。本研究主要進(jìn)行了以下幾方面的工作：一.GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞ROS產(chǎn)生的影響及機(jī)制 1.檢測(cè)GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞ROS產(chǎn)生的影響。

4、 2.采用小分子RNA干擾(siRNA)技術(shù)消除HUVECs的NADPH氧化酶的p47phox亞基，觀察其對(duì)TNFα誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞ROS產(chǎn)生的影響。觀察GB和α-ZAL對(duì)TNFα誘導(dǎo)HUVECsp47phoxmRNA和蛋白表達(dá)的影響。 二.GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞ROS介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響觀察GB和α-ZAL對(duì)TNFα誘導(dǎo)HUVECs中ERK的激活及轉(zhuǎn)錄因子thenuclearfactorkappaB(

5、NF-κB)、thespecificityprotein-1(SP-1)、theactivatorprotein1(AP-1)表達(dá)的影響。 三.GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞HO-1基因表達(dá)的影響觀察ANDPH氧化酶來源的ROS及GB和α-ZAL對(duì)TNFα誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1mRNA及蛋白表達(dá)的影響。 四.ROS及GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞胞漿游離鈣水平的影響用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)胞漿游離鈣濃度。

6、為觀察ROS對(duì)TNFα刺激引起的胞漿游離鈣([Ca2+]i)的影響，采用siRNA技術(shù)消除HUVECs的NADPH氧化酶的p47phox亞基。觀察GB和α-ZAL對(duì)TNFα刺激引起的[Ca2+]i的影響。 結(jié)果顯示：1.GB和α-ZAL明顯抑制TNFα誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生。用siRNA技術(shù)消除NADPH氧化酶的p47phox亞基完全阻斷TNFα誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生。GB和α-ZAL明顯降低TNFα誘導(dǎo)的p47phoxmRNA

7、和蛋白的表達(dá)。 2.TNFα刺激明顯增加ERK2的磷酸化及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和SP-1的表達(dá)，對(duì)AP-1的表達(dá)無明顯影響。GB和α-ZAL預(yù)處理均明顯抑制TNFα誘導(dǎo)的NF-κB表達(dá)，完全阻斷TNFα誘導(dǎo)的SP-1的表達(dá)，對(duì)AP-1表達(dá)基本沒有影響。 3.GB和α-ZAL及轉(zhuǎn)染p47phoxsiRNA顯著抑制了TNFα誘導(dǎo)HUVECs中HO-1mRNA和蛋白的表達(dá)。 4.TNFα刺激使HUVECs胞漿游[Ca2+

8、]i明顯增加；轉(zhuǎn)染p47phoxsiRNA完全消除了TNFα刺激引起[Ca2+]i的增加；GB和α-ZAL明顯抑制了TNFα引起的[Ca2+]i的增加。 上述結(jié)果提示，GB和α-ZAL均能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞中TNFα誘導(dǎo)的ROS的產(chǎn)生及由ROS介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和基因表達(dá)。主要機(jī)制是通過抑制NADPH氧化酶。TNFα刺激內(nèi)皮細(xì)胞胞漿游離鈣的增加依賴ROS，可被GB和α-ZAL抑制。因此，GB和α-ZAL可能具有抗氧化應(yīng)激，保護(hù)血管內(nèi)