NHE1基因調(diào)控細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡對(duì)SGC-7901胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:胞膜離子交換蛋白Na<'+>-H<'+>交換泵第1亞型(Na<'+>-H<'+>exchanger1,NHE1)是存在于所有真核細(xì)胞的一種跨膜蛋白,是維持細(xì)胞內(nèi)pH值(intracellular,pH,pHi)在中性或偏堿性的重要膜蛋白,是pHi調(diào)節(jié)的重要機(jī)制之一.近年來研究發(fā)現(xiàn),NHE1基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平顯增高,與腫瘤的發(fā)生和抗凋亡生長(zhǎng)有密切關(guān)系.NHE1基因超表達(dá)是阻止癌細(xì)胞內(nèi)酸化,使癌細(xì)胞免遭凋亡,以維持其抗凋亡生長(zhǎng)

2、特性的重要機(jī)制之一.該課題試圖通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù),研究NHE1反義基因?qū)GC-7901胃癌細(xì)胞增殖、凋亡及其生物學(xué)行為的影響,探討通過使細(xì)胞內(nèi)酸化誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡治療胃癌的新方法.方法:利用亞克隆技術(shù)構(gòu)建人NHE1反義結(jié)構(gòu)基因哺乳動(dòng)物真核表達(dá)質(zhì)粒,通過DOTAP脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)將反義真核表達(dá)質(zhì)粒和空載體分別轉(zhuǎn)入SGC-7901胃癌細(xì)胞中,經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對(duì)轉(zhuǎn)染基因的整合鑒定后,觀察基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞內(nèi)pH值、NHE1

3、蛋白表達(dá)、體外生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞周期以及雙層軟瓊脂克隆形成能力和裸鼠成瘤力的影響.結(jié)論:(1)成功構(gòu)建了NHE1反義基因哺乳動(dòng)物真核表達(dá)質(zhì)粒,并成功轉(zhuǎn)染SGC-7901胃癌細(xì)胞.(2)首次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染NHE1反義基因后,SGC-7901胃癌細(xì)胞細(xì)胞器發(fā)生數(shù)量和形態(tài)學(xué)方面的變化,胃癌細(xì)胞形態(tài)惡性程度降低.(3)轉(zhuǎn)染NHE1反義基因后,SGC-7901胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯減慢,出現(xiàn)接觸抑制,呈單層生長(zhǎng),增殖指數(shù)降低,細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞周期輕度左移,