川銀花主流品種(細(xì)氈毛忍冬)特征性成分的分離及含量測定研究.pdf

1、細(xì)氈毛忍冬Lonicera similes Hemsl為現(xiàn)行版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2008年版）川銀花項(xiàng)下的基源植物之一，且為川產(chǎn)金銀花的主流品種。為配合四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目“川銀花主流品種（細(xì)氈毛忍冬）特征性成分的分離及含量測定研究”，本文在前期研究的基礎(chǔ)上，針對細(xì)氈毛忍冬的有效部位黃酮類和皂苷類成分進(jìn)行分離、純化，并選擇具有專屬性的指標(biāo)成分，建立其定性、定量分析方法，為完善和提高現(xiàn)有的川銀花質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)支撐，同時(shí)推動(dòng)川產(chǎn)藥

2、材“地方標(biāo)準(zhǔn)”上升為“國家標(biāo)準(zhǔn)”，進(jìn)而擴(kuò)大川產(chǎn)藥材優(yōu)勢資源的使用范圍，促使我省貧困地區(qū)南江縣的自然資源優(yōu)勢向經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢的轉(zhuǎn)化，促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。研究結(jié)果如下:
　　1脫離傳統(tǒng)的“系統(tǒng)溶劑法提取分離-藥效學(xué)篩選-有效部位分離純化”的模式，直接以已知的金銀花類藥材除有機(jī)酸類的另外兩類有效部位黃酮類和皂苷類成分為切入點(diǎn)，進(jìn)行提取分離，尋找專屬性成分。
　　1.1首次進(jìn)行了大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬總黃酮的工藝研究。
　　本文針對

3、細(xì)氈毛忍冬總黃酮純化工藝，以靜態(tài)吸附率及解析率為指標(biāo)，考察了5種不同極性的大孔吸附樹脂，優(yōu)選出了適宜的大孔樹脂型號(hào)，并考察了影響其動(dòng)態(tài)吸附和解析的相關(guān)因素，最終確定大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬總黃酮的最佳工藝為:D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物，上柱藥液生藥濃度為0.10 g/ml，比上柱量2.74g/g(藥材/干樹脂)上柱吸附。
　　1.2采用大孔樹脂、硅膠柱層析、凝膠色譜等方法對細(xì)氈毛忍冬各大孔樹脂流分進(jìn)行分離純化;從中分離得到

4、11個(gè)化合物，采用1HNMR、13C NMR等多種現(xiàn)代波譜解析技術(shù)，并結(jié)合化學(xué)反應(yīng)、對照品比較、文獻(xiàn)對比等手段鑒定其結(jié)構(gòu)，最終確定了9個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分別為:5-羥基-7，4'-二甲氧基黃酮(Ⅰ)，蘆丁(Ⅲ)，槲皮素(Ⅳ)，穗花杉雙黃酮(Ⅴ)，秦皮乙素(Ⅶ)，B-谷甾醇(Ⅷ)，5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮(Ⅸ)，齊墩果酸(Ⅹ)，B-胡蘿卜苷(Ⅺ)。其中化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ這5個(gè)化合物均為黃酮類化合物，化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、

5、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ這6個(gè)化合物均為首次從細(xì)氈毛忍冬中分離得到。
　　2首次進(jìn)行了細(xì)氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的薄層色譜鑒別研究，建立了其微乳薄層色譜鑒別方法。
　　通過對提取方法、水解時(shí)間、展開系統(tǒng)、點(diǎn)樣量、展距、展開溫度、薄層板飽和時(shí)間等的考察，最終建立了細(xì)氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的微乳薄層鑒別方法，以含水量75％的微乳液-甲酸(9∶1)為展開劑，分離效果好，展開后Rf值適中，色譜斑點(diǎn)

6、清晰。通過對10批不同產(chǎn)地的細(xì)氈毛忍冬對口藥材及商品藥材的薄層色譜試驗(yàn)，表明該方法對細(xì)氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的鑒別有較好的適應(yīng)性，重現(xiàn)性較好。
　　同時(shí)采用該方法進(jìn)行了細(xì)氈毛忍冬與現(xiàn)行版《中國藥典》收載的金銀花（忍冬）、山銀花（灰氈毛忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）的對比鑒別，結(jié)果表明，除忍冬外其它幾種銀花均未檢出5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮，表明該成分用于細(xì)氈毛忍冬的薄層色譜鑒別具有一定的專屬性，

7、雖然忍冬中也可檢出該成分，但二者的其它色譜斑點(diǎn)有差異，可予以區(qū)別。
　　3首次進(jìn)行了細(xì)氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量測定研究，建立了其HPLC含量測定方法。
　　通過對最大吸收波長、色譜條件的篩選，供試品溶液制備方法的考察以及精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收試驗(yàn)等方法學(xué)考察，建立了細(xì)氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的HPLC含量測定方法，該方法簡便、快速，可操作性強(qiáng)。通過對10批不同產(chǎn)

8、地的細(xì)氈毛忍冬對口藥材及商品藥材中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量測定，結(jié)果表明，最高可達(dá)1.08％，最低為0.36％，平均為0.68％。
　　同時(shí)測定了現(xiàn)行版《中國藥典》收載的金銀花（忍冬）、山銀花（灰氈毛忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）中該成分的含量，結(jié)果表明，忍冬中雖含5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮，但含量明顯低于細(xì)氈毛忍冬，為0.14％、0.11％，而其它幾種銀花中均未檢測出此成分。表明5-羥基-7，3'，