肝癌HepG2細(xì)胞PHD3基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立及其對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)增殖的影響.pdf

1、目的：建立PHD3基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的肝癌HepG2細(xì)胞株及探討PHD3基因在裸鼠體內(nèi)對(duì)調(diào)節(jié)肝癌移植瘤生長(zhǎng)和浸潤(rùn)中的作用，為進(jìn)一步明確PHD3基因?qū)Ω伟┑淖饔脵C(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：⑴pcDNA3.1-PHD3重組質(zhì)粒及pcDNA3.1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝癌HepG2細(xì)胞株。⑵轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-PHD3重組質(zhì)粒及pcDNA3.1空白質(zhì)粒的人肝癌HepG2細(xì)胞株的陽(yáng)性篩選與克隆。⑶轉(zhuǎn)染組為轉(zhuǎn)染有pcDNA3.1-PHD3重組質(zhì)粒的人肝癌

2、HepG2細(xì)胞株，對(duì)照組為轉(zhuǎn)染有pcDNA3.1重組質(zhì)粒的人肝癌HepG2細(xì)胞株?？瞻捉M為人肝癌HepG2細(xì)胞株。⑷裸鼠皮下成瘤:將轉(zhuǎn)染組、對(duì)照組及空白組細(xì)胞分別于裸鼠右腋下皮下注射以形成皮下腫瘤，每組注射10只。⑸裸鼠尾靜脈注射形成內(nèi)臟轉(zhuǎn)移瘤:轉(zhuǎn)染組、對(duì)照組及空白組細(xì)胞分別于裸鼠尾靜脈注射以形成內(nèi)臟轉(zhuǎn)移瘤，每組注射10只。⑹觀察轉(zhuǎn)染組、對(duì)照組及空白組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。⑺腫瘤生長(zhǎng)變化:每隔兩天用游標(biāo)卡尺測(cè)量各組裸鼠皮下腫瘤的短徑(a)、長(zhǎng)

3、徑(b)，按(a2×b)/2公式計(jì)算腫瘤體積，并記錄皮下腫瘤體積變化。⑻抑瘤率:抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-轉(zhuǎn)染組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。⑼病理學(xué)檢查:裸鼠皮下及肝、肺臟內(nèi)成瘤大小，浸潤(rùn)范圍，腫瘤組織分化差異等。
　　 結(jié)果：①通過(guò)RT-PCR測(cè)定轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中PHD3基因的表達(dá)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞存在PHD3基因表達(dá)。②轉(zhuǎn)染組細(xì)胞呈橢圓形或短梭形，聚集成團(tuán)，細(xì)胞之間連接疏散，狀態(tài)較差，生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞貼壁能

4、力差，易脫落，培養(yǎng)瓶中可見(jiàn)死亡細(xì)胞黑色殘骸。對(duì)照組和空白組細(xì)胞呈堆積生長(zhǎng)，單個(gè)細(xì)胞形態(tài)不明顯，細(xì)胞之間交織緊密。細(xì)胞貼壁能力較好，細(xì)胞狀態(tài)好，生長(zhǎng)旺盛。③轉(zhuǎn)染組裸鼠生活狀態(tài)較為正常、食欲旺盛、行動(dòng)自如，無(wú)明顯體質(zhì)衰弱狀況?？瞻捉M和對(duì)照組裸鼠逐漸出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、活動(dòng)減少。④空白組裸鼠于接種后6天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為462.22mm3。對(duì)照組裸鼠于接種后6天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為457.88mm3。轉(zhuǎn)染組裸鼠于接種

5、后9天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為294.79mm3。⑤抑瘤率:抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-轉(zhuǎn)染組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。抑瘤率=462.22-294.79/462.22x100％=36.22％。⑥皮下成瘤:轉(zhuǎn)染組腫瘤大小及浸潤(rùn)范圍均小于空白組和對(duì)照組，腫瘤分化稍好于空白組和對(duì)照組，腫瘤血管形成較空白組和對(duì)照組差。空白組和對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。⑦內(nèi)臟成瘤:轉(zhuǎn)染組內(nèi)臟無(wú)形成明確的腫瘤，空白組和對(duì)照組肺部無(wú)形成腫瘤，肝