羅格列酮（BRL49653）致胰島素敏感性作用與脂聯(lián)素的關(guān)系研究.pdf

1、目的:(1)研究二甲雙胍對高胰島素血癥患兒血清脂源性細(xì)胞因子的影響；(2)嘗試對國內(nèi)外同類模型稍加改進(jìn)，建立一種更符合2型糖尿病特點(diǎn)的動物模型；(3)觀察實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠胰島素抵抗、糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中糖脂代謝指標(biāo)及CRP水平的變化，并檢測FFA、IL-6、TNF-α、脂肪因子瘦素、脂聯(lián)素的變化及羅格列酮治療對這些變化的影響，以進(jìn)一步明確糖尿病的發(fā)生、發(fā)展及羅格列酮的作用機(jī)制；(4)觀察2型糖尿病大鼠脂肪組織脂聯(lián)素及骨骼肌組織脂聯(lián)素

2、受體R1基因表達(dá)的變化及羅格列酮治療對其變化的影響。分析血中影響脂聯(lián)素及其受體R1基因表達(dá)的因素；(5)從細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)水平來探討羅格列酮增加脂聯(lián)素分泌的分子機(jī)制。 方法：(1)通過對空腹血糖和空腹胰島素的篩查發(fā)現(xiàn)兒童和青少年肥胖者中的高胰島素血癥患兒。用二甲雙胍對高胰島素血癥的肥胖患兒進(jìn)行及早干預(yù)，研究治療前后糖代謝、脂源性激素等指標(biāo)的變化，以進(jìn)一步了解二甲雙胍的作用特點(diǎn)，為臨床用藥提供參考。(2)采用幼齡雄性Wistar大鼠高

3、脂飲食誘導(dǎo)6周，禁食12h后尾靜脈注射小劑量鏈脲佐菌素STZ25mg.Kg-1破壞胰島β細(xì)胞的方法，普通飼料提供總熱量為14.88J.g1(蛋白質(zhì)20％，碳水化合物53％，脂肪9％)；高脂飼料總熱量為20.08J.g-1(蛋白質(zhì)15％，碳水化合物51％，脂肪25％。口服糖耐量試驗(yàn)確診的方法建立2型糖尿病模型。(3)將糖尿病大鼠分為兩組，其中一組用羅格列酮治療7周。于實(shí)驗(yàn)過程的第6、9、16周分別取血檢測空腹血糖、空腹胰島素及血清CRP。

4、另設(shè)普通飼料組作對照。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測FFA、IL-6、TNF-α、脂肪因子瘦素、脂聯(lián)素水平。CRP檢測用免疫散射比濁法測定。脂聯(lián)素用ELISA方法檢測。(4)口服葡萄糖耐量試驗(yàn)篩選出糖尿病大鼠，隨機(jī)分為糖尿病組和羅格列酮治療組，并設(shè)正常對照。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測脂肪組織脂聯(lián)素及骨骼肌組織脂聯(lián)素受體R1mRNA表達(dá)。ELISA法檢測血清脂聯(lián)素，同時(shí)檢測血清糖、脂代謝指標(biāo)和其他脂肪因子水平。(5)用25mmol/l

5、葡萄糖加0.6nmol/l胰島素前孵育SW872脂肪細(xì)胞18小時(shí)，制成胰島素抵抗細(xì)胞模型。將不同濃度的羅格列酮作用于此模型，孵育24小時(shí)，觀察其葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)及脂聯(lián)素分泌的變化。用信號通路阻斷劑GW9662、Wortmannin、AG490作用后再觀察羅格列酮對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)及脂聯(lián)素分泌的影響。 結(jié)果:(1)肥胖患兒血清脂聯(lián)素水平明顯下降，其下降與胰島素抵抗程度相平行。輕中度肥胖組及重度肥胖組脂聯(lián)素水平與對照組相比，差異均有顯著性。而二

6、甲雙胍治療對肥胖者的低脂聯(lián)素血癥沒有明顯的改善，輕中度肥胖組治療后(8.9±2.3μg/ml)與治療前(8.4±3.2μg/ml)相比，P＞0.05；重度肥胖組治療后7.03±3.0μg/ml與治療前6.5±1.2μgμg/ml相比P＞0.05。與對照組相比，肥胖者血清抵抗素水平明顯升高，而治療后抵抗素水平(輕中度肥胖組22.0±5.1ng/ml/16.5±6.0ng/ml，重度肥胖組30.6±11.7ng/ml/22.3±5.2ng/

7、ml)不但沒有降低，反而明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肥胖組存在嚴(yán)重的瘦素抵抗，而二甲雙胍治療可有效改善高瘦素血癥，與治療前相比(輕中度肥胖組19.6±6.3ng/ml/24.3±1.8ng/ml，重度肥胖組24.7±5.3ng/ml/30.2±5.1ng/ml)，差異顯著。(2)大鼠在第7周STZ注射前即已形成高胰島素血癥，胰島素抵抗。到第9周即已有高甘油三脂、高膽固醇血癥。(3)2型糖尿病形成過程中，炎性因子CRP動態(tài)升高，9周(15

8、.00±3.95mg/L)、16周(14.00±3.37mg/L)明顯高于6周(7.00±3.51mg/L)，P＜0.05；糖尿病組明顯高于正常對照組。糖尿病組血清IL-6(251.50±120.11mg/L比145.13±40.44mg/L)、TNF-α(2.95±0.93ng/ml比2.20±0.55ng/ml)、瘦素(24.89±12.84ng/ml比16.14±5.98ng/ml)水平升高，P＜0.05；而脂聯(lián)素(5.50±2.

9、05μg/ml比8.68±2.52μg/ml)水平明顯下降。羅格列酮治療可有效降低升高的CRP、IL-6、TNF-α及瘦素，升高減低的脂聯(lián)素水平。(4)糖尿病組血清脂聯(lián)素明顯降低(正常組8.68±2.52μg/ml，糖尿病組5.50±2.05μg/ml，治療組8.57±3.05μg/ml，F(xiàn)=3.752,P＜0.05)；脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達(dá)降低(正常組0.81±0.24，糖尿病組0.37±0.12，治療組0.73±0.25，F(xiàn)=1

10、0.239，P＜0.01)，羅格列酮治療使兩者顯著改善。糖尿病組骨骼肌組織脂聯(lián)素受體R1mRNA表達(dá)沒有明顯改變(正常組0.67±0.16，糖尿病組0.74±0.23，治療組0.72±0.18，F(xiàn)=2.532，P=0.103)。相關(guān)分析顯示脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與血清胰島素(r=-0.66，P＜0.05)、甘油三酯(r=-0.58，P＜0.05)、膽固醇(r=-0.49，P＜0.05)、白介素-6(r=-0.49，P＜0.05)、腫

11、瘤壞死因子-α(r=-0.43，P＜0.05)呈負(fù)相關(guān)，而脂聯(lián)素受體R1mRNA表達(dá)則與血清糖、脂代謝指標(biāo)及脂肪因子間無明顯相關(guān)性。(5)羅格列酮增加SW872脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的2-DOG葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，同時(shí)增加脂聯(lián)素的分泌。PPAR-γ核受體阻斷劑GW9662、PI-3K信號通路阻斷劑Wortmannin可明顯阻滯羅格列酮刺激的糖轉(zhuǎn)運(yùn)和脂聯(lián)素分泌，而JAK-STAT2作用不明顯。 結(jié)論:(1)本研究數(shù)據(jù)提示二甲雙胍作為降糖藥

12、和胰島素增敏劑，在對脂源性激素的改善上，有其局限性。(2)STZ注射后OGTT顯示糖尿病成功率高。此方法建立的大鼠模型，極好地模擬了人類的糖尿病發(fā)生、發(fā)展過程，為后續(xù)試驗(yàn)打下基礎(chǔ)。(3)羅格列酮可全面改善2型糖尿病血清脂肪細(xì)胞因子紊亂。(4)糖尿病時(shí)骨骼肌組織脂聯(lián)素受體R1基因表達(dá)無改變；血清脂聯(lián)素水平下降由脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達(dá)降低引起，羅格列酮治療可以改善這種降低。(5)這些數(shù)據(jù)說明，羅格列酮直接作用于PPARs以增加脂聯(lián)素分泌