大鼠活體碾壓傷皮瓣顯微鏡觀察模型的建立及VNP對(duì)碾壓撕脫皮瓣保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)建設(shè)的調(diào)整發(fā)展和現(xiàn)代交通工具的迅猛增加，由交通事故和機(jī)械損傷所造成的皮膚碾壓撕脫傷已成為臨床的一種常見(jiàn)損傷。與普通的切割傷不同，皮膚碾壓撕脫傷損傷程度重，并發(fā)癥多，在臨床救治中，應(yīng)盡可能保留有血運(yùn)的撕脫皮瓣。但往往手術(shù)時(shí)尚有血液循環(huán)反應(yīng)的碾壓撕脫組織，在術(shù)后逐漸發(fā)生栓塞壞死，即發(fā)生皮瓣的繼發(fā)性壞死，造成患者術(shù)后外形不佳和后遺畸形等。因此，皮膚撕脫傷的救治已成為整形外科領(lǐng)域的重要研究課題之一。本課題就是在我科建立的小型動(dòng)物皮膚

2、碾壓撕脫傷模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究皮膚碾壓撕脫傷的損傷機(jī)制，并使用一種新型的藥物——血管鈉肽（VNP），研究其對(duì)碾壓撕脫皮瓣的保護(hù)作用，以期為臨床治療提供一種新思路。
　　本課題的動(dòng)物模型是應(yīng)用我們自行研制的碾壓撕脫模型機(jī)建立的，在大鼠背部設(shè)計(jì)為蒂在尾部的縱行3cm×9cm大小任意皮瓣，并將此皮瓣放于碾壓撕脫模型機(jī)上進(jìn)行碾壓，實(shí)踐證實(shí)此模型機(jī)可構(gòu)建出穩(wěn)定的碾壓撕脫傷模型。利用熒光標(biāo)記原理，在皮瓣碾壓前后將皮瓣置于活體顯微觀察窗上，

3、我們成功在活體大鼠上構(gòu)建了動(dòng)態(tài)觀察碾壓傷皮瓣微循環(huán)改變的體內(nèi)模型，通過(guò)觀察被標(biāo)記的白細(xì)胞，可測(cè)定碾壓前后皮瓣微血管血流速度、功能性毛細(xì)血管密度、白細(xì)胞黏附及血栓形成等微循環(huán)改變情況。結(jié)果顯示碾壓后微血管血流速度及功能性毛細(xì)血管密度較碾壓前明顯降低（P＜0.01），碾壓后30min即可見(jiàn)明顯血栓形成及其形成過(guò)程，最終出現(xiàn)大量無(wú)血液灌流的毛細(xì)血管及大量微血栓的形成。
　　碾壓撕脫傷后7天我們對(duì)各組皮瓣的成活率進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示采用V

4、NP治療可顯著提高碾壓撕脫皮瓣的成活面積。為了研究血管鈉肽（VNP）對(duì)碾壓撕脫皮瓣的保護(hù)機(jī)制，我們?cè)诖笫笮g(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)免疫組化、雙抗夾心ELISA和生物化學(xué)分析方法，對(duì)不同組間皮瓣組織的P-選擇素、L-選擇素，血清和局部組織液中的TNF-α、IL-β及IFN-γ含量，以及組織中MPO、MDA和GSH-PX等成分進(jìn)行了分析。P-選擇素和L-選擇素是重要的粘附分子，導(dǎo)白細(xì)胞的粘附滲出和微血栓的形成，是引起皮瓣繼發(fā)性壞死的關(guān)鍵因素。在碾

5、壓撕脫傷發(fā)生后早期，即可觀察到P-選擇素和L-選擇素的表達(dá)水平明顯上調(diào)，而VNP則通過(guò)抑制他們的表達(dá)（P＜0.05），進(jìn)而減輕傷后白細(xì)胞貼壁粘附和血栓形成以及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。作為重要的炎癥因子，TNF-α、IL-β及IFN-γ的含量也在傷后有明顯的升高，尤以局部組織液中的含量變化水平最為明顯，而VNP治療后可顯著減低這些炎癥因子的水平（P＜0.05），減輕炎癥反應(yīng)，從而減輕了組織損傷程度，提高皮瓣成活率。從VNP對(duì)碾壓撕脫

6、傷后MPO、MDA和GSH-PX水平的影響結(jié)果來(lái)看，VNP在碾壓傷后對(duì)抗活性氧自由基，提高組織抗氧化能力等方面同樣起到了積極的作用，從而減輕皮瓣組織中毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。通過(guò)激光多普勒血流儀和組織切片的觀察，了解碾壓撕脫傷后組織的灌流和損傷情況，結(jié)果顯示：碾壓撕脫傷發(fā)生后皮瓣中、遠(yuǎn)端血流顯著降低，而VNP治療組的血流情況得到了明顯改善（P＜0.05）；組織切片也顯示，使用VNP進(jìn)行治療后組織損傷明顯減輕，白細(xì)胞浸潤(rùn)減少，血栓形成減少。