吸入糖皮質激素對哮喘宿主細菌防御的影響與作用機制.pdf

1、目的:糖皮質激素是目前廣泛用于治療哮喘的最有效藥物,吸入糖皮質激素仍然是控制哮喘氣道炎癥的主要治療方法,但有關哮喘患者使用吸入糖皮質激素對宿主細菌防御影響的相關報道較少。本實驗通過建立哮喘小鼠動物模型,經氣道吸入糖皮質激素,采用銅綠色假單胞菌經鼻吸入,探討吸入糖皮質激素對哮喘宿主的細菌防御的影響,并就其機制進行探討。
　　 方法:選取6-7周健康BALB／c雌性小鼠50只,隨機分為對照組,哮喘組,哮喘感染組,吸入布地奈德組,吸入

2、布地奈德感染組,每組各10只。小鼠用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)溶液致敏和激發(fā),對照組僅腹腔注射同等劑量生理鹽水。然后依次霧化吸入布地奈德和感染3×105 CFU銅綠色假單胞菌。24小時后處死小鼠,收集和分離血清并取下肺組織。肺組織勻漿液細菌培養(yǎng)作細菌定量。肺組織HE染色光鏡下觀察肺組織炎癥細胞侵潤程度,根據(jù)肺部炎癥改變的組織病理學評分標準細則評分(分為1-4分)。免疫組織化學法檢測氣道上皮細胞中CRAMP的表達水平。免疫蛋白

3、印記(Western Blot)法半定量測定肺組織中CRAMP的表達水平。ELISA法測定外周血血清中IL-4和IFN-γ的表達。
　　 結果:1.小鼠一般情況觀察:哮喘組小鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、鼻腔分泌物增多、撓鼻、呼吸急促和毛發(fā)暗淡無光、毛發(fā)豎立等癥狀。布地奈德組激發(fā)后表現(xiàn)較哮喘組明顯減輕。綠膿桿菌感染24小時后,哮喘感染組出現(xiàn)行動遲緩、眼睛緊閉、蜷縮一團、鼻腔分泌物增多,耳溫冰涼等表現(xiàn)。布地奈德感染組除有上述表現(xiàn)外,還表現(xiàn)有

4、明顯的寒顫、小鼠扎堆擠在一塊,食欲明顯下降。2.肺組織鏡下氣道炎癥的改變:哮喘組小鼠支氣管和肺泡腔縮小,肺泡間隔增寬,支氣管管壁及肺間質可見大量炎癥細胞浸潤,以嗜酸粒細胞為主,支氣管、細支氣管及肺泡腔內可見滲出物,氣管粘膜上皮水腫損傷,部分壞死脫落,伴杯狀細胞增生。吸入布地奈德組氣道炎癥明顯輕于哮喘組,經藥物治療后氣道周圍炎癥明顯減輕。感染綠膿桿菌24小時后,哮喘感染組支氣管和肺泡腔縮小,部分肺泡完全縮小,肺泡間隔增寬,支氣管管壁及肺間

5、質可見大量炎癥細胞浸潤,以嗜酸粒細胞為主,支氣管、細支氣管及肺泡腔內可見大量滲出物,氣管粘膜部分壞死脫落,伴杯狀細胞增生。吸入布地奈德感染組支氣管和肺泡腔明顯縮小,細支氣管及部分肺泡腔完全消失,支氣管及肺泡腔內可見廣泛大量滲出物,氣管粘膜部分壞死脫落,可見膿細胞。同時肺組織炎癥評分顯示:哮喘組與對照組相比炎癥侵潤明顯CP<0.01,布地奈德組與哮喘相比炎癥減輕ap<0.01,布地奈德感染組與哮喘感染組相比炎癥侵潤明顯bp<0.01具有統(tǒng)

6、計學有意義。3.肺部細菌定量:布地奈德感染組細菌菌落數(shù)明顯高于哮喘感染組,兩者間差異性顯著P<0.05。4.肺臟CRAMP的表達水平:免疫組織化學檢測肺組織CRAMP表達水平,結果發(fā)現(xiàn)布地奈德感染組的抗菌肽表達水平明顯低于哮喘感染組。免疫印記檢測肺組織CRAMP表達水平結果顯示布地奈德感染組的條帶灰度值明顯較哮喘感染組降低,通過Quantity One軟件分析各組灰度值,顯示布地奈德感染組與哮喘感染組相比差異性顯著(P<0.05)。5.

7、小鼠外周血血清中IL-4和IFN-γ水平的測定:哮喘組IL-4水平與對照組相比明顯升高(P<0.01)、IFN-γ水平明顯降低(P<0.01)。布地奈德組IL-4水平低于哮喘組(P<0.01),但IFN-γ水平兩組間無明顯差異(P>0.05)。哮喘感染組IL-4水平與對照組明顯升高(P<0.01)、IFN-γ水平明顯降低(P<0.01)。布地奈德感染組IL-4水平高于哮喘感染組(P<0.01),IFN-γ水平低于哮喘感染組,兩組間差異有

8、統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 結論:1.哮喘小鼠的血清中IL-4水平顯著升高,IFN-γ水平明顯下降,證實了Th1／Th2平衡失調在哮喘發(fā)病機理中起著重要的作用。2.吸入布地奈德能夠減輕哮喘小鼠的氣道炎癥,但卻未能明顯改善Th1／Th2平衡失調。3.吸入布地奈德可以①減少哮喘宿主在抗菌反應中CRAMP在肺組織內的活化表達；②減弱哮喘宿主清除細菌的能力；③加重變應原誘發(fā)及細菌感染的氣道炎癥。吸入糖皮質激素可抑制哮喘宿主細菌防