酪酪肽和維生素E琥珀酸酯對(duì)人食管腺癌SEG-1細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、流行病學(xué)資料顯示，食管腺癌(esophageal adenocarcinoma，EA)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)有日益上升的趨勢(shì)，尤其是在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，食管腺癌己成為發(fā)病率上升速度最快的惡性腫瘤，Barrett食管(Barrett’s esophagus，BE)是其主要的危險(xiǎn)因素。食管腺癌預(yù)后差，為此加強(qiáng)深入研究，采取醫(yī)學(xué)干預(yù)和預(yù)防措施具有重要意義。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，胃腸肽類激素酪酪肽(peptide yy，PYY)對(duì)胃腸道腫瘤的生物學(xué)行

2、為具有重要的調(diào)控作用。 PYY是一種由36個(gè)氨基酸組成的多肽，主要存在于胃腸道黏膜的L型內(nèi)分泌細(xì)胞中。PYY具有多種調(diào)節(jié)胃腸道的功能，以抑制作用為主，包括減少胃液分泌和胰腺的外分泌，減慢胃排空和小腸的活動(dòng)，減少胃腸道和胰腺的血流量，抑制膽囊收縮素的生成。PYY在循環(huán)中分解為兩種形式PYY(1-36)和PYY(3-36)。PYY(1-36)通過(guò)與Y1和Y5受體結(jié)合發(fā)揮刺激食欲，增加體重的作用，而PYY(3-36)與Y2受體結(jié)合可抑

3、制食欲，減輕體重。肥胖是與食管腺癌密切相關(guān)的危險(xiǎn)因素之一，而PYY(3-36)具有潛在的抗肥胖作用。國(guó)外研究證實(shí)PYY存在于多種腫瘤組織中并抑制如胰腺癌、結(jié)腸癌、食管腺癌、乳腺癌、前列腺癌多種腫瘤的生長(zhǎng)，并可緩解惡液質(zhì)狀態(tài)。PYY抑制胰腺和胸腺腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制可能是直接或間接通過(guò)減少細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosinemonophosp-hate，cAMP)的含量。但其確切機(jī)制尚不清楚。維生素E琥珀酸酯(vitamin E

4、succinate，VES)是維生素E(VE)的衍生物，與VE相比，VES的性質(zhì)穩(wěn)定，VES在體內(nèi)和體外均可有效地抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，如B淋巴瘤、前列腺癌、子宮內(nèi)皮細(xì)胞癌、胃癌和結(jié)腸癌等都具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用，而對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞無(wú)毒性。VES可能有望成為一種有潛力的抗癌藥物。目前有關(guān)PYY和VES對(duì)食管腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究尚少，本研究通過(guò)體外培養(yǎng)SEG-1細(xì)胞以探討PYY和VES對(duì)食管腺癌細(xì)胞增殖的抑制及凋亡的誘導(dǎo)作用。目的：觀察

5、PYY、VES對(duì)人食管腺癌細(xì)胞系SEG-1增殖與凋亡及PYY對(duì)SEG-1細(xì)胞內(nèi)cAMP含量的影響。旨在探討PYY和VES對(duì)SEG-1細(xì)胞的作用，為今后臨床應(yīng)用PYY和VES防治食管腺癌提供實(shí)驗(yàn)或理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人食管腺癌細(xì)胞系SEG-1，應(yīng)用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，于37℃、5％CO2恒溫箱內(nèi)飽和濕度下培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為五組：空白對(duì)照組、乙醇對(duì)照組(終濃度為0.2％)、PYY組(500 pmol·ml-1)、VE

6、S組(20mg·L-1)、聯(lián)合用藥組(500pmol·ml-1PYY+20mg·L-1VES)。 1.MTT方法檢測(cè)PYY、VES分別與聯(lián)合干預(yù)在體外對(duì)SEG-1細(xì)胞增殖的影響：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔板，經(jīng)PYY、VES處理細(xì)胞12、24、48h后，按步驟加入20μl MTT溶液和150 μl二甲基亞砜，置酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定各孔在570nm處的光吸收值(OD)，并計(jì)算生長(zhǎng)抑制率。 2.PI染色流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

7、百分率：收集經(jīng)PYY、VES分別及聯(lián)合作用24h的SEG-1及對(duì)照組細(xì)胞，冷PBS漂洗，70％乙醇4℃預(yù)冷固定，上機(jī)檢測(cè)前離心去固定液，0.5％胃蛋白酶消化，碘化丙錠(Propidium Iodide，PI：50mg/L Trinton X-100 1.0％)室溫避光染色。流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用軟件進(jìn)行分析。 3.末端缺口原位標(biāo)記(TUNEL)法分析細(xì)胞凋亡測(cè)定細(xì)胞凋亡指數(shù)：收集經(jīng)PYY、VES干預(yù)24h后的細(xì)胞爬片，加入相

8、關(guān)試劑，按照TUNEL試劑盒說(shuō)明書操作。 4采用放射免疫法測(cè)定不同濃度組(10-5、10-6、10-7、10-8mol·L-1)的PYY干預(yù)24h后的人食管腺癌細(xì)胞中cAMP的含量。 結(jié)果：1 PYY、VES對(duì)SEG-1細(xì)胞增殖的影響：MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示PYY和VES均在一定范圍內(nèi)(12～48h)呈時(shí)間依賴性地抑制SEG-1細(xì)胞的增殖；聯(lián)合用藥組的細(xì)胞增殖抑制率顯著高于PYY或VES單用組(P＜0.01)。 2

9、.PYY、VES對(duì)SEG-1細(xì)胞凋亡的影響：(1)流式細(xì)胞儀測(cè)定顯示與對(duì)照組相比，PYY組、VES組和聯(lián)合用藥組出現(xiàn)了明顯的亞二倍體凋亡峰，其凋亡率分別為(29.94±0.36)％、(12.71±1.45)％、和(35.30±2.38)％，顯著高于對(duì)照組的(1.74±0.08)％，聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率顯著高于單一用藥組(P＜0.01)。 (2)TUNEL法檢測(cè)結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，PYY組、VES組和聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增加，凋亡

10、指數(shù)分別為(24.54±1.10)％、(14.62±2.96)％和(39.75±3.43)％。 3.cAMP含量的測(cè)定：PYY濃度分別為10-5、10-6、10-7、10-8 mol·L-1細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度分別為(313.0±8.2)pmol·L-1、(282.3±10.2)pmol·L-1、(239.7±8.0)pmol·L-1、(174.2±5.6)pmol·L-1。與對(duì)照組相比，PYY可減少SEG-1細(xì)胞內(nèi)cAMP的含量