大鼠無肝狀態(tài)下異丙酚藥代動(dòng)力學(xué)及肝外UGT1A6基因表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：異丙酚是臨床肝移植手術(shù)麻醉維持最為常用的靜脈麻醉藥，通常情況下主要由肝臟代謝后，經(jīng)腎臟排出體外。目前研究發(fā)現(xiàn)肝移植無肝期異丙酚雖失去肝臟的主要代謝作用，但其代謝狀況未受明顯影響，這提示異丙酚存在肝外代謝并且無肝期的肝外代謝可能增強(qiáng)，但尚未證實(shí)。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A6(UGT1A6)能使異丙酚葡醛酸化后經(jīng)腎臟直接排出體外，肝臟中含量最多，機(jī)體的其它許多組織器官也有表達(dá)。UGT1A6的表達(dá)水平是通過即時(shí)的、組織特異性的和環(huán)境

2、因素影響的調(diào)節(jié)方式進(jìn)行的。肝移植無肝期機(jī)體內(nèi)環(huán)境變化較大，機(jī)體中某些激素水平可能影響UGT1A6的肝外表達(dá)，從而影響異丙酚的肝外代謝。本實(shí)驗(yàn)以大鼠為對(duì)象，研究無肝狀態(tài)下異丙酚藥代動(dòng)力學(xué)，并對(duì)無肝期前后腎臟、小腸、肺臟及腦等部位的UGT1A6基因表達(dá)變化進(jìn)行研究，在此基礎(chǔ)上檢測無肝期前后GH、FT4的血清水平變化，初步探討無肝期影響UGT1A6基因表達(dá)的可能機(jī)制，從而初步闡釋無肝期異丙酚藥代動(dòng)力學(xué)的形成原因。 材料和方法：實(shí)驗(yàn)分為

3、三部分：1.大鼠無肝期異丙酚藥代動(dòng)力學(xué)的變化。采用異丙酚標(biāo)準(zhǔn)品(1g/ml，純度99.9％)，通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)分析儀，制備大鼠異丙酚血藥濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立微量血樣檢測異丙酚濃度的實(shí)驗(yàn)方法。SPF級(jí)雄性SD大鼠10只，乙醚麻醉后，行右側(cè)頸深靜脈切開，置入1.0號(hào)硅膠管。分別于肝門阻斷前后，通過右頸深靜脈兩次注入異丙酚10mg/kg，于兩次注射后的2、4、6、8、10、15、20、30、45、60min時(shí)相點(diǎn)處，通過右

4、頸深靜脈采血100μl，置入裝有500μl去離子水的EP管中溶血，漩渦振蕩，保存在4℃冰箱中待檢。采用反相高效液相色譜分析法檢測各時(shí)相點(diǎn)血藥濃度變化，并應(yīng)用3P-87藥代動(dòng)力學(xué)軟件測算比較無肝期前后異丙酚的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。2.異丙酚代謝相關(guān)UGT1A6無肝期肝外表達(dá)的研究。SPF級(jí)雄性SD大鼠15只隨機(jī)分為3組(5只/組)，A組為對(duì)照組(無肝期前)，B組阻斷肝門30min(無肝期30min)，C組阻斷肝門60min(無肝期60min)，

5、乙醚麻醉后截取各組大鼠小腸、腎臟、肺臟、腦組織，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)，檢測各組UGT1A6mRNA的表達(dá)。3.無肝期前后大鼠體內(nèi)GH、FT4水平的變化。SPF級(jí)雄性SD大鼠20只，乙醚麻醉后，行右側(cè)頸深靜脈切開，置入1.0號(hào)硅膠管。于麻醉后(無肝期前)、肝門阻斷30min(無肝期30min)、60min(無肝期60min)等時(shí)間點(diǎn)，從右頸深靜脈采血1ml，采用放射免疫法檢測三個(gè)時(shí)相點(diǎn)GH、FT4血清濃度的變化。

6、 結(jié)果：1.在選定的色譜條件下，測得異丙酚色譜圖被測物與內(nèi)標(biāo)物兩者峰形良好，分離完全，無雜質(zhì)峰干擾，異丙酚及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為8.02min和4.77min；異丙酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為C=0.183X+5.04×10-3，R2=0.9999，P＜0.05，大鼠體內(nèi)異丙酚最低檢測濃度為0.25μg/ml；檢測方法精密度優(yōu)良；2.無肝期前后，異丙酚單次劑量注射血藥濃度變化無明顯差異，藥代動(dòng)力學(xué)各參數(shù)中T1/2α、T1/2β、Vd無明顯改變

7、(P＞0.05)，AUC明顯增大(P＜0.05)，CL減少非常顯著(P＜0.01)。3.肝外器官(小腸、腎臟、肺臟和腦)UGT1A6的基因表達(dá)，在無肝期30min和60min均顯著高于無肝期前(P＜0.01)，無肝期30min與60min相比較無顯著差異(P＞0.05)。4.GH血清水平無肝期30min和60min均顯著高于無肝期前(P＜0.01)，無肝期30min與60min相比較無顯著差異(P＞0.05)。5.FT4血清水平無肝期3

8、0min和60min均顯著高于無肝期前(P＜0.01)，無肝期30min與60min相比較有顯著差異(P＜0.05) 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)建立的微量血樣檢測異丙酚血藥濃度的方法特異性強(qiáng)、日內(nèi)日間變異小、線性范圍廣、簡便準(zhǔn)確，可作為檢測異丙酚血藥濃度的常規(guī)方法。 2.無肝期異丙酚藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)為T1/2α、T1/2β、Vd無明顯改變，AUC明顯增大，CL減少非常顯著。 3.無肝期異丙酚的肝外代謝顯示增強(qiáng)。