切除腎上腺對大鼠EAE敏感性的影響及其機(jī)理的探討.pdf

1、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)靜脈血管周圍單核細(xì)胞浸潤和白質(zhì)脫髓鞘為特征的自身免疫性疾病。Lewis大鼠、DA大鼠和PL/J小鼠對EAE發(fā)病較為敏感，研究發(fā)現(xiàn)Lewis大鼠體內(nèi)存在下丘腦-垂體-腎上腺軸功能(HPA)缺陷，血漿中皮質(zhì)類固醇水平較低，是Lewis大鼠易感EAE的主要原因；但其價(jià)格昂貴、不易獲得或無來源等因素限制了該類動物在EAE的應(yīng)用。目前常用Wistar大鼠來研究EAE模型

2、的制作，但其成模率低、敏感性差。本實(shí)驗(yàn)通過切除Wistar大鼠腎上腺損傷HPA功能，使其體內(nèi)皮質(zhì)類固醇下降，對HPA功能損傷的Wistar大鼠在用豚鼠全脊髓勻漿(Guinea pig spinal cord homogenate，GPSCH)誘發(fā)的EAE癥狀、體征等進(jìn)行評價(jià)，研究腎上腺切除導(dǎo)致下丘腦-垂體-腎上腺軸功能缺陷對Wistar大鼠誘發(fā)的EAE敏感性的影響，并探討了其機(jī)理。
　　 1.Lewis大鼠EAE模型的建立及鹽酸

3、奧芬米洛干預(yù)
　　 建立Lewis大鼠EAE模型，并觀察Lewis大鼠EAE的發(fā)病過程、神經(jīng)癥狀評分、MBP特異性淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能、皮質(zhì)醇、MBP抗體、各細(xì)胞因子及皮層和下丘腦Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的變化，并用鹽酸奧芬米洛對Lewis大鼠EAE模型進(jìn)行評價(jià)和驗(yàn)證。研究發(fā)現(xiàn)，Lewis大鼠經(jīng)GPSCH-CFA免疫誘導(dǎo)后，第10d開始體重明顯下降，隨后均出現(xiàn)臨床癥狀，后肢無力、麻痹，伴有大小便失禁，嚴(yán)重者四肢麻痹或癱瘓，

4、平均神經(jīng)癥狀評分最高為3.10分，發(fā)病率為100％；Lewis大鼠MBP特異性淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和ConA T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)均明顯升高(P<0.01)；Lewis大鼠血清中皮質(zhì)醇略微升高；血清中MBP抗體、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4和IFN-γ/IL-4比值顯著升高(P<0.01)，大腦皮層和下丘腦Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯減少(P<0.01)，皮層和下丘腦Bax蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P<0.01)。EAE大鼠灌胃給予1.0

5、mg·kg-1鹽酸奧芬米洛后，體重未降低，均未出現(xiàn)臨床癥狀，MBP特異性淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)、ConA T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和MBP抗體均明顯降低(P<0.01)，血清中皮質(zhì)醇顯著升高(P<0.05)，血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2和IFN-γ/IL-4顯著降低(P<0.01)。
　　 2.切除腎上腺對大鼠誘發(fā)EAE敏感性的影響及其機(jī)理的研究
　　 通過切除Wistar大鼠腎上腺損傷HPA功能，建立HPA軸功能損傷的W

6、istar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型，并觀察HPA軸功能損傷的Wistar大鼠EAE的發(fā)病過程、神經(jīng)癥狀評分、MBP特異性淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能、皮質(zhì)醇、MBP抗體、各細(xì)胞因子及皮層和下丘腦Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的變化，并用鹽酸奧芬米洛對Wistar大鼠EAE模型進(jìn)行評價(jià)和驗(yàn)證。
　　 研究發(fā)現(xiàn)，Lewis大鼠血清中正常皮質(zhì)醇水平(213.2±27.4ng/ml)低于Wistar大鼠血清中正常皮質(zhì)醇水平(360.5±

7、29.6ng/ml)。Wistar大鼠切除單側(cè)或雙側(cè)腎上腺后，血清中皮質(zhì)醇水平顯著降低(P<0.05，P<0.01)，雙側(cè)切除組大鼠血清中皮質(zhì)醇水平明顯低于單側(cè)切除組(P<0.01)，兩側(cè)腎上腺切除的大鼠血清皮質(zhì)醇水平(183.3±69.7ng/ml)降低至Wistar大鼠正常皮質(zhì)醇水平50％，而且略低于正常Lewis大鼠的皮質(zhì)醇水平。
　　 GPSCH-CFA免疫誘導(dǎo)后，雙側(cè)切除腎上腺的Wistar大鼠在免疫后12-16 d出

8、現(xiàn)臨床癥狀和體重明顯下降，表現(xiàn)為尾部無力、拖垂、活動明顯減少，后肢無力、麻痹，伴有大小便失禁，嚴(yán)重者四肢麻痹，甚至癱瘓；雙側(cè)、單側(cè)切除腎上腺Wistar大鼠和假手術(shù)Wistar大鼠在平均神經(jīng)癥狀評分最高分別為4.60、1.19和0.83分，發(fā)病率分別為100％、73.33％和58.33％；雙側(cè)切除組Wistar大鼠MBP特異性淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)、Con A引起的T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和MBP抗體均升高(P<0.05)；單側(cè)切除組和雙側(cè)切除組大

9、鼠血清中IFN-γ、TNF-α和IL-2水平顯著升高(P<0.05，P<0.01)，雙側(cè)切除組大鼠血清中Th2細(xì)胞因子IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值顯著升高(P<0.05)；假手術(shù)組、單側(cè)切除組和雙側(cè)切除組大鼠皮層和下丘腦中Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.05，P<0.01)，雙側(cè)切除組大鼠皮層和下丘腦中Bax蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.05，P<0.01)。給予1.0mg·kg-1鹽酸奧芬米洛后，單側(cè)治療組大鼠血清中皮質(zhì)

10、醇水平明顯高于單側(cè)切除組和雙側(cè)切除組(P<0.01)，雙側(cè)治療組大鼠血清中皮質(zhì)醇水平明顯高于雙側(cè)切除組(P<0.01)，且皮質(zhì)醇水平恢復(fù)至正常水平；單側(cè)治療組和雙側(cè)治療組大鼠MBP特異性淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和ConAT淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)明顯低于雙側(cè)切除組大鼠(P<0.05，P<0.01)；單側(cè)治療組和雙側(cè)治療組大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4和IFN-γ/IL-4比值水平均明顯降低(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論：本實(shí)

11、驗(yàn)成功建立了Lewis大鼠EAE模型，并用鹽酸奧芬米洛進(jìn)行了EAE模型的驗(yàn)證；Lewis大鼠經(jīng)GPSCH-CFA免疫誘導(dǎo)后，均出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，MBP特異性淋巴細(xì)胞和ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞功能明顯升高，Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子顯著升高，Th1/Th2失衡。實(shí)驗(yàn)通過Wistar大鼠雙側(cè)腎上腺切除導(dǎo)致HPA功能缺陷，顯著增加Wistar大鼠誘發(fā)的EAE敏感性，建立了一種新型Wistar大鼠EAE模型；為EAE模型的制作提供了一種新方法。奧芬米