欖香烯對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB-,44-細(xì)胞Survivin、NF-κB基因表達(dá)和端粒酶活性的影響.pdf

1、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma,RB)是嬰幼兒最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤，嚴(yán)重危害患者的視力和生命，近年來化學(xué)治療已逐漸成為治療RB最重要的方法之一。目前應(yīng)用于RB化療的藥物多存在副作用大、易導(dǎo)致耐藥等缺點，尋找高效、低毒的化療藥物具有重要意義。欖香烯(elemene，化學(xué)名：1-甲基-1-乙烯基-2，4-二異丙基環(huán)已烷)是從中藥溫莪術(shù)揮發(fā)油中提取的油狀物單體，屬于不含氮的倍半烯烴類，為非細(xì)胞毒性的國家二類抗癌新藥。研究證實欖香

2、烯對體內(nèi)外多種腫瘤具有較強的抑制和殺傷效應(yīng)，但它的抗瘤機制尚未完全闡明。本實驗采用欖香烯作用于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞，探討其抗癌機理，為臨床應(yīng)用欖香烯治療RB提供理論和實驗依據(jù)。 第一章欖香烯抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞生長的實驗研究。 目的：觀察欖香烯體外抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞生長的作用。 方法：應(yīng)用臺盼藍(lán)拒染及MTT比色法觀察欖香烯及足葉乙甙對視網(wǎng)膜母細(xì)

3、胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞的生長抑制作用，通過統(tǒng)計分析確立欖香烯處理HXO-RB<,44>細(xì)胞的濃度。 結(jié)果：欖香烯對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞體外增殖有顯著抑制作用，呈時間和劑量依賴性，欖香烯作用 HXO-RB<,44>細(xì)胞24h、48h、72h的IC<,50>值分別為127.75μg/mL、85.43μg/mL和52.95μg/mL；欖香烯和足葉乙甙聯(lián)合用藥其對HXO-RB<,44>細(xì)胞的抑制率大于單獨應(yīng)用

4、欖香烯或足葉乙甙。 結(jié)論：欖香烯可抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞生長，欖香烯及和足葉乙甙聯(lián)合用藥可加強殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。 第二章欖香烯誘導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>凋亡及對凋亡相關(guān)基因 Survivin、NF-kB表達(dá)的影響。 目的：探討欖香烯對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞凋亡及對survivin、NF-κB基因表達(dá)的影響。 方法：體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB

5、<,44>細(xì)胞，取對數(shù)生長期細(xì)胞分對照組和藥物處理組，藥物處理組欖香烯終濃度為40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL，作用24h、48h、72h后收集細(xì)胞。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察欖香烯對HXO-RB<,44>細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期的影響；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和Western Blot法檢測各實驗組survivin、NF-κB p65蛋白表達(dá)；用RT-PCR方法檢測各組細(xì)胞survivin mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：欖香烯誘導(dǎo)H

6、XO-RB<,44>細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡率隨著欖香烯作用時間和劑量的增加而增加；隨著欖香烯作用時間延長，HXO-RB<,44>細(xì)胞出現(xiàn)G<,2>/M期的阻滯。survivin、NF-κB p65在HXO-RB<,44>細(xì)胞中均有表達(dá)；隨著欖香烯作用時間延長，survivin、NF-κB p65表達(dá)下降。 結(jié)論：人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞株存在surivin、NF-κ Bp65的高表達(dá)，欖香烯可通過下調(diào)survivi

7、n、NF-κB p65基因的表達(dá)而誘導(dǎo)HXO-RB<,44>細(xì)胞凋亡。 第三章欖香烯對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞端粒酶、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶活性的影響。 目的：探討端粒酶和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶在欖香烯抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞生長、誘導(dǎo)其凋亡過程中的作用及其意義。 方法：體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞，分對照組和藥物處理組，藥物處理組欖香烯終濃度為80μg/mL，分別作用2

8、4h、48h、72h后收集細(xì)胞。應(yīng)用MTT比色法觀察欖香烯對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB<,44>細(xì)胞的生長抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察欖香烯對HXO-RB<,44>細(xì)胞的凋亡的影響；應(yīng)用端粒重復(fù)擴(kuò)增(TRAP)法檢測各實驗組細(xì)胞端粒酶活性，Western Blot法測定hTERT蛋白表達(dá)。 結(jié)果：隨著欖香烯作用時間延長，HXO-RB><,44>細(xì)胞生長抑制率和凋亡率增加。HXO-RB<,44>細(xì)胞中端粒酶活性和hTERT蛋白表達(dá)