菩人丹超微粉對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Ang-2、TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　通過(guò)觀察菩人丹超微粉(Purendansuperfinepowder,PRD)對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管生成素2(Angiopoietin-2,Ang-2)和腫瘤壞死因子α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)表達(dá)的影響,探討PRD對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的保護(hù)作用。
　　方法:
　　36只Wistar大鼠按隨機(jī)原則分為3組:正常對(duì)照組、糖尿病模型組和PRD治療組,每組12只大鼠。糖尿病

2、模型組和PRD治療組大鼠均采用2％STZ(25mg/kg·d)連續(xù)腹腔注射3天,建立2型糖尿病大鼠模型。以大鼠血糖≥16.7mmol/L作為成模判定標(biāo)準(zhǔn)。模型成功建立后,PRD治療組大鼠按PRD1.8g/kg·d標(biāo)準(zhǔn)灌胃給藥,糖尿病模型組大鼠按同樣標(biāo)準(zhǔn)給于不含PRD的溶劑灌胃,連續(xù)灌胃12周。正常對(duì)照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)不做處理。采用ONETOUCH血糖儀檢測(cè)各組大鼠的血糖水平;采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosinsta

3、ining,HE)觀察大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化;采用SP免疫組織化學(xué)染色法和Westernblot法檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜Ang-2蛋白的表達(dá);采用Westernblot法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)法檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜TNF-α蛋白和mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的血糖水平:糖尿病模型組大鼠血糖為21.63±1.01mmol/

4、L,與正常對(duì)照組大鼠的血糖4.57±0.42mmol/L相比顯著升高(P<0.01);PRD治療組大鼠血糖為14.60±0.95mmol/L,明顯低于糖尿病模型組大鼠的血糖(P<0.01)。
　　2.各組大鼠視網(wǎng)膜組織病理學(xué)改變:正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜層次清晰,結(jié)構(gòu)完整,內(nèi)界膜表面平滑,各級(jí)神經(jīng)細(xì)胞排列整齊有序,大小均勻。糖尿病模型組大鼠視網(wǎng)膜可見(jiàn)內(nèi)界膜表面粗糙不平,明顯腫脹增厚、部分內(nèi)界膜破裂,偶見(jiàn)突出于內(nèi)界膜的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,

5、視網(wǎng)膜層次清晰欠佳,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞數(shù)量減少,可見(jiàn)細(xì)胞空泡樣變、核固縮等現(xiàn)象。PRD治療組視網(wǎng)膜內(nèi)界膜表面粗糙欠平,輕度腫脹增厚、視網(wǎng)膜分層較清晰,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列輕度紊亂,細(xì)胞數(shù)量輕度減少。
　　3.各組大鼠視網(wǎng)膜Ang-2的表達(dá)
　　3.1.SP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:Ang-2蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,表達(dá)位于細(xì)胞漿。Ang-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層。與正常對(duì)照組相比糖尿病模型組

6、胞漿Ang-2免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈深棕黃色;PRD治療組Ang-2免疫陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)較糖尿病模型組明顯減弱,胞漿呈棕黃色。
　　3.2.采用MiVnt圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化陽(yáng)性表達(dá)面積進(jìn)行定量分析結(jié)果:與正常對(duì)照組相比糖尿病模型組陽(yáng)性表達(dá)面積明顯增加(P<0.01);PRD治療組與糖尿病模型組相比,陽(yáng)性表達(dá)面積減少(P<0.01)。
　　3.3.Westernblot法檢測(cè)Ang-2蛋白表達(dá)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠視

7、網(wǎng)膜Ang-2蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網(wǎng)膜Ang-2蛋白的表達(dá)與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　4.各組大鼠視網(wǎng)膜TNF-α的表達(dá)
　　4.1.Westernblot法檢測(cè)TNF-α蛋白表達(dá)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠視網(wǎng)膜TNF-α蛋白的表達(dá)明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網(wǎng)膜TNF-α蛋白的表達(dá)與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　4.

8、2.RT-PCR檢測(cè)TNF-αmRNA表達(dá)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,糖尿病模型組大鼠視網(wǎng)膜TNF-αmRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網(wǎng)膜TNF-αmRNA的表達(dá)與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　PRD可以改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變,這一作用可能是通過(guò)下調(diào)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Ang-2和TNF-α的表達(dá),從而減少視網(wǎng)膜微血管滲漏及病理性新生血管生成,發(fā)揮其對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管損