外周血中腫瘤化療敏感基因TYMS和ERCC1對胃腸道腫瘤患者化療效果的評估作用.pdf

1、胃腸道腫瘤如胃癌、大腸癌、結腸癌等是世界范圍內最常見的惡性腫瘤，我國是胃腸道腫瘤高發(fā)區(qū)。早期腫瘤手術切除為主，輔以化療，晚期則以化療為主，可見化療是腫瘤治療中占有重要地位。目前在臨床治療中，5-氟尿嘧啶（5-Fu）與鉑類藥物作為一線化療藥物被廣泛應用。不同患者對相同化療方案的反應性不同，預后也存在差異，說明不同患者對化療的敏感性不同。造成這種化療敏感性差異的重要原因之一是遺傳變異，這種個體基因的遺傳多態(tài)性可改變化療藥物作用的關鍵酶的表達

2、及其生物學活性，從而調節(jié)化療藥物代謝與作用靶點的功能，最終影響個體對化療的反應。隨著腫瘤對化療藥物耐藥性的出現(xiàn)，尋找能夠衡量腫瘤對化療藥物敏感度的標記物和如何逆轉腫瘤耐藥逐漸成為研究的熱點。胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase ，TYMS)和切除修復交叉互補基因1(excision Repair Cross-Complementing 1,ERCC1)是最早引起人們關注的腫瘤化療敏感基因，其多態(tài)性與腫瘤化療藥物代

3、謝密切關聯(lián)。國內外大量報道證實TYMS基因5'端非編碼區(qū)增強子區(qū)域存在一個28bp的串聯(lián)重復序列，根據(jù)此序列的重復次數(shù)，主要分為重復兩次的2R型和重復3次的3R型，最常見的基因型為3R/3R，2R/3R和2R/2R，由于不同的基因型TYMSmRNA的穩(wěn)定性不同，表達的蛋白產(chǎn)物的量也不一樣，因此造成攜帶不同基因型TYMS的個體對5氟尿嘧啶（5-Fu）反應性存在差異。ERCC1基因表達產(chǎn)物可以修復鉑類化療藥物引起的DNA損傷，但是，如果ER

4、CC1基因第4外顯子的118位密碼子中出現(xiàn)由C→T堿基的突變(C118T)，ERCC1蛋白的表達量就會下降，從而增強鉑類化療藥物對腫瘤的殺傷作用。
　　目前，臨床上對于化療敏感基因檢測多采用腫瘤組織標本，但患者病程存在個體差異，可能存在不適合進行手術切除等原因，導致腫瘤組織比較難以獲得。并且，組織在提取核酸過程中有很多的影響因素，對目的基因多態(tài)性的檢測存在一定的局限性。因此，尋求一種方便易取的標本類型檢測腫瘤化療敏感基因多態(tài)性迫在

5、眉睫，這對腫瘤患者個體化治療方案的制定將有重要的理論和實踐意義。
　　近年來有研究報道，在大腸癌、直結腸癌等消化道腫瘤患者外周血中檢測到TYMS和ERCC1基因多態(tài)性，但是，對于胃癌患者外周血中是否能夠檢測到TYMS合ERCC1基因多態(tài)性，以及這些基因多態(tài)性是否與胃癌組織中存在一致性，目前尚不清楚。本研究首先檢測胃癌患者腫瘤組織與外周血中TYMS和ERCC1基因多態(tài)性，研究此兩種基因在腫瘤組織與外周血中的多態(tài)性是否一致，探究外周血

6、基因多態(tài)性檢測代替組織檢測的可行性，在此基礎上，收集經(jīng)5-Fu和鉑類藥物化療的消化道腫瘤如大腸癌、胃癌、結腸癌等患者外周血，研究外周血TYMS基因與ERCC1基因多態(tài)性在評估腫瘤患者化療療效中的作用，為腫瘤患者個體化治療提供一個簡便的實驗室評估檢測指標。
　　方法
　　1.實驗分組:(1)未化療患者標本分組:收集43例未經(jīng)化療胃癌患者術前抗凝外周血及腫瘤組織，將其分為外周血組與腫瘤組織組。(2)化療患者標本分組:收集76例采

7、用5-Fu和鉑類藥物進行化療的腫瘤患者的外周血，按照實體腫瘤的療效評價標準(RECIST)對化療患者的近期療效進行評價，分為化療有效組與無效組，有效組包括完全緩解(CR)和部分緩解(PR)例數(shù)，無效組包括病情無變化(SD)和病情惡化(PD)例數(shù)。
　　2.應用PCR法和限制性片段長度多態(tài)性聚合酶連式反應(PCR-RFLP)法分別檢測外周血與腫瘤組織中TYMS和ERCC1基因的基因型。
　　3.應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計

8、分析，所得資料均用樣本例數(shù)表示，Spearman法進行樣本組間相關性分析，兩組間的比較用卡方連續(xù)校正法檢驗，F(xiàn)isher精確檢驗法分析基因型與化療療效的關系，雙側檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果
　　1.TYMS和ERCC1基因各基因型與胃癌患者臨床病理因素無顯著相關（P＞0.05）。
　　2.未化療患者外周血與腫瘤組織中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型檢出率均為72.09％(

9、31/43)、27.91％(12/46)，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型檢出率均為81.39％(35/43)、18.61％(8/43)，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　3.按照RECIST標準對化療患者的近期療效進行評價，CR0例，PR24例，SD18例，PD34例。
　　4.化療患者中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型檢出率分別為65.79％(

10、50/76)、34.21％(26/76)。攜帶3R/3R基因型的患者共50例，其中CR0例、PR9例、SD14例、PD27例，化療有效組9例，無效組41例，化療有效率為18％(9/50);攜帶(2R/2R、2R/3R)基因型的患者共26例，其中CR0例、PR15例、SD4例、PD7例，化療有效組15例，無效組11例，化療有效率為57.69％(15/26)，經(jīng)統(tǒng)計學分析，有顯著相關性（F=14.53，P＜0.05)。
　　5.化療患

11、者ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型檢出率分別為中63.16％(48/76)、36.85％(28/76)。攜帶C/C基因型的患者共48例，其中CR0例、PR23例、SD10例、PD15例，化療有效組23例，無效組25例，化療有效率為47.91％(23/48);攜帶(T/T、C/T)基因型的患者共28例，其中CR0例、PR1例、SD8例、PD19例，化療有效組1例，無效組27例，化療有效率為3.57％(1/28)。經(jīng)統(tǒng)計學分析

12、，有顯著相關性（F=19.89，P＜0.05）。
　　結論
　　1.未化療胃癌患者外周血和腫瘤組織中TYMS與ERCC1基因各基因型檢出率一致，表明外周血標本檢測可替代腫瘤組織檢測TYMS和ERCC1基因多態(tài)性。
　　2.在5-Fu化療過程中，攜帶TYMS基因2R/2R或2R/3R基因型的患者療效良好，攜帶3R/3R基因型的患者療效不佳，表明外周血中TYMS基因多態(tài)性可用于評估5-Fu的療效。
　　3.在鉑類藥物