原發(fā)性肝細(xì)胞癌中ING1基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建ING1b表達(dá)質(zhì)粒。檢測原發(fā)性肝細(xì)胞癌標(biāo)本及配對的非腫瘤組織中ING1基因總體表達(dá)水平以及ING1基因主要轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)錄水平的變化，初探ING1基因不同轉(zhuǎn)錄本在肝細(xì)胞癌進(jìn)展中的意義。 方法：1、將ING1b全長cDNA片段連接入pUB6A載體。2、瞬時轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，于48小時后提取細(xì)胞總蛋白，用Western印跡證實其表達(dá)。以該蛋白樣品作為后續(xù)Western印跡實驗的陽性對照。3、用Western印跡方法檢測多個腫瘤細(xì)

2、胞系及有代表性的肝組織標(biāo)本中ING1基因不同轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達(dá)譜。4、用免疫組織化學(xué)方法及半定量RT-PCR方法，分別檢測31對肝細(xì)胞癌標(biāo)本及配對的非腫瘤組織中ING1基因總體表達(dá)水平以及ING1基因兩種主要轉(zhuǎn)錄本的轉(zhuǎn)錄水平。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建了p33ING1b-V5融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒。 2.在HepG2、Bel7402、MCF7以及Hela細(xì)胞系總蛋白中，只檢測到了p33ING1b。 3.在肝細(xì)胞癌標(biāo)本及

3、非腫瘤組織中ING1a、ING1b為該基因的主要轉(zhuǎn)錄本。 4.在低分化腫瘤病例組及TNMⅢA-ⅢB期病例組內(nèi)，腫瘤組織中ING1基因總體表達(dá)水平高于配對的非腫瘤組織(p＜0.01)，腫瘤組織中ING1b轉(zhuǎn)錄水平明顯高于配對的非腫瘤組織(p＜0.01)。而在高分化腫瘤病例組及臨床分期較早的TNMⅠ-Ⅱ期病例組內(nèi)，腫瘤組織與配對的非腫瘤組織間ING1基因總體表達(dá)水平以及ING1b轉(zhuǎn)錄水平無明顯差異(p＞0.05)。在腫瘤組織與配對的