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1、目的:1.觀察PGE2對(duì)胃癌MKN28細(xì)胞粘附、遷移及侵襲的影響。2.檢測(cè)PGE2對(duì)胃癌MKN28細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。3.探討EGFR和ERK2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在PGE2影響胃癌MKN28細(xì)胞粘附、遷移、侵襲能力及VEGF表達(dá)過(guò)程中可能的作用。 方法:1.細(xì)胞培養(yǎng):取人胃腺癌細(xì)胞株MKN28按常規(guī)方法培養(yǎng)。2.外源性PGE2處理后,使用MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞粘附能力變化;WoundHealing實(shí)驗(yàn)及Transwell小室結(jié)合倒置
2、鏡觀察腫瘤細(xì)胞遷移能力變化;Transwell小室結(jié)合Matrix膠檢測(cè)腫瘤細(xì)胞侵襲能力的變化。3.Real-TimePCR實(shí)驗(yàn)結(jié)合RT-PCR凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)PGE2對(duì)腫瘤細(xì)胞VEGFmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響。4.Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PGE2對(duì)腫瘤細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響及對(duì)EGFR和ERK2磷酸化水平的影響。5.Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)照組、PGE2處理組及EGFR信號(hào)通路特異性抑制劑AG1478、ERK信號(hào)通路特
3、異性抑制劑PD98059處理組VEGF蛋白表達(dá)水平的變化,同時(shí)檢測(cè)EGFR、ERK2磷酸化水平的變化。 結(jié)果:1.外源性PGE2可明顯增加胃癌MKN28細(xì)胞的粘附比率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)量,10μM的PGE2作用3h后,粘附細(xì)胞比率較對(duì)照組增加64.03﹪(P<0.01);遷移細(xì)胞及侵襲細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組增加182.78﹪(P<0.01)、217.57﹪(P<0.01)。 2.ERK信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059及EGF
4、R信號(hào)通路特異性抑制劑AG1478均可顯著抑制由PGE2誘導(dǎo)的MKN28細(xì)胞粘附、遷移及侵襲。 3.Real-TimePCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):對(duì)照組MKN28細(xì)胞中有微量VEGFmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá),經(jīng)用0.5μM、1μM、5μM、10μMPGE2處理后,VEGFmRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平均顯著增加且與PGE2濃度之間存在明顯相關(guān)性。 4.PGE2刺激后,ERK2磷酸化水平、EGFR磷酸化水平及VEGF蛋白表達(dá)水平均有
5、明顯提高。 5.AG1478可明顯抑制PGE2所誘導(dǎo)的EGFR磷酸化、ERK2磷酸化、及VEGF的表達(dá)。 6.PD98059可顯著抑制PGE2所誘導(dǎo)的ERK2磷酸化及VEGF的表達(dá),但對(duì)EGFR磷酸化水平無(wú)明顯影響。 結(jié)論:1.PGE2可顯著增加胃癌MKN28細(xì)胞的粘附、遷移及侵襲能力,PGE2促進(jìn)腫瘤細(xì)胞粘附、遷移及侵襲可能與激活MAPK/ERK及EGFR信號(hào)通路相關(guān)。 2.外源性PGE2可顯著增加胃癌
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