CBP通過調節(jié)組蛋白乙酰化水平參與神經病理性疼痛機制的研究.pdf

1、目的
　　構建SD大鼠坐骨神經慢性縮窄性損傷(CCI)模型,觀察大鼠疼痛行為學及組蛋白乙酰轉移酶CBP表達變化趨勢。鞘內注射CBPshRNA觀察脊髓水平抑制CBP對大鼠神經病理性疼痛以及對組蛋白乙?；?、COX-2表達的影響,研究CBP神經病理性疼痛發(fā)病的具體機制。
　　方法
　　1.成年雄性SD大鼠30只,隨機分為3組:正常組(n=5)、Sham組(n=5)和CCI組(n=20)。CCI組建立左側CCI模型,Sha

2、m組僅暴露左側坐骨神經而不結扎,術前1天及術后1、3、5、7、10、12、14、21天測定左后足機械痛閾和熱痛閾,術后3、7、14、21天分批灌注處死,取腰段脊髓免疫組化方法觀察組蛋白乙酰轉移酶CBP的表達變化。
　　2.成年雄性SD大鼠40只,鞘內置管成功5天后建立左側CCI模型,隨機分為4組(n=10):Sham+NS組、CCI+NS組、CCI+NC組、CCI+CBP shRNA組。CCI術后7天鞘內分別注射生理鹽水、陰性對照

3、病毒載體(RNAi-NC-LV)、CBP shRNA病毒載體(CBPRNAi-LV)各20μ1。術前1天、術后3、5、7、10、12、14天測定大鼠左后足機械痛閾和熱痛閾。于CCI術后14天取腰段脊髓,免疫組化法檢測CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2形態(tài)學表達的變化,RT-PCR檢測CBP、COX-2 mRNA水平的變化,western blot檢測COX-2蛋白水平的變化。
　　結果
　　1.與Sham組相比,CC

4、I組大鼠術側后足機械痛閾和熱痛閾明顯下降,在術后第7天最明顯,持續(xù)至第21天(P＜0.05)。腰段脊髓免疫組化結果表明CBP陽性細胞以灰質表達為主,灰質全層均有表達,脊髓背角Ⅰ～Ⅲ層高表達,陽性顆粒主要位于胞核,胞漿少量存在。CCI組腰段脊髓背角淺層的CBP陽性細胞數從術后第3天開始明顯增多,第14天達到高峰,并持續(xù)至第21天(P＜0.05)。
　　2.CCI大鼠左后足機械痛閾和熱痛閾在各測量時間點均明顯降低,與Sham組相比差異

5、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);鞘內注射CBPRNAi-LV可明顯緩解大鼠左后足機械痛閾和熱痛閾的降低(P＜0.05),其作用可持續(xù)至注射后第7天,而鞘內注射RNAi-NC-LV后,大鼠機械痛閾和熱痛閾無明顯變化(P＞0.05)。CCI大鼠腰段脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2陽性細胞數以及CBP mRNA、COX-2 mRNA、COX-2蛋白均明顯升高(P＜0.05),鞘內注射CBPRNAi-LV可明顯抑制上述蛋白和mRNA

6、的表達增加,而鞘內注射RNAi-NC-LV則無明顯作用(P＞0.05)。
　　結論
　　1.神經病理性疼痛大鼠出現明顯隨時間變化的疼痛行為,腰段脊髓背角CBP陽性細胞在術后表達變化與疼痛行為學變化基本一致;
　　2.CCI術后7天鞘內注射CBP shRNA可以提高其機械痛閾和熱痛閾,緩解疼痛;
　　3.CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2在CCI術后14天表達增加,鞘內注射CBP shRNA能顯著干擾CBP