烏司他丁聯(lián)合Ghrelin對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠腸功能障礙的影響.pdf

1、背景及目的:
　　膿毒癥是多因素共同作用導(dǎo)致的獲得性疾病,可由先天應(yīng)激,細(xì)胞損傷以及器官功能障礙等因素引起,系感染、燒傷、嚴(yán)重創(chuàng)傷、外科大手術(shù)、病理產(chǎn)科、中毒及心肺復(fù)蘇術(shù)后常見(jiàn)的并發(fā)癥,是ICU的首要致死原因,其病死率仍高達(dá)30％-70%,其發(fā)生率仍以每年1.5%-8%的速度上升。膿毒癥時(shí)最常累及腸道,當(dāng)腸道損傷時(shí),其通透性增加、腸屏障功能受損,腸道細(xì)菌及其毒素得以吸收進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)而發(fā)生細(xì)菌移位,使全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)加

2、劇、失控,嚴(yán)重時(shí)誘發(fā)多器官功能障礙綜合征(MODS),甚至危及患者生命。已經(jīng)有眾多研究表明腸道功能降低與腸道屏障關(guān)系密切。腸道屏障由機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障與生物屏障共同構(gòu)成,其中機(jī)械屏障和免疫屏障的功能是判斷腸道屏障功能的常見(jiàn)指標(biāo),機(jī)械屏障是指完整的彼此緊密連接的腸粘膜上皮結(jié)構(gòu)。腸粘膜防御素-5(RD-5)和腸三葉因子家族-3(TFF-3)蛋白是常用的判斷腸免疫屏障功能的指標(biāo)蛋白。而眾所周知,TNF-α、IL-6和 HMGB1是膿

3、毒癥發(fā)生、發(fā)展中最重要的促炎因子,嚴(yán)重影響膿毒癥中腸道功能的恢復(fù),甚至造成全身多器官的損害。以上活性因子可以促進(jìn)炎癥反應(yīng),改變血管緊張度以及通過(guò)特定G蛋白受體增加血管通透性。另外這些細(xì)胞因子間形成了聯(lián)系緊密的互動(dòng)關(guān)系,可以形成“炎癥瀑布效應(yīng)”。近期有多項(xiàng)研究表明TNF-α、IL-6、HMGB1與膿毒癥的嚴(yán)重程度及預(yù)后關(guān)系密切。因此觀察 TNF-α、IL-6、HMGB1等指標(biāo)對(duì)于膿毒癥的預(yù)防和治療具有重要意義。
　　烏司他丁(Uli

4、nastatin)系健康成年男性尿液中分離、純化出來(lái)的一種糖蛋白,其可對(duì)多種蛋白水解酶的活性有抑制作用,是一種廣譜的蛋白酶抑制劑(Ulinary trypsin inhibitor,UTI),另具有抑制溶酶體酶的釋放、抑制心肌抑制因子產(chǎn)生、穩(wěn)定溶酶體膜,清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。
　　Ghrelin是生長(zhǎng)激素促分泌素受體(GSHR)的內(nèi)源性配體,大部分Ghrelin由胃底部X/ A樣細(xì)胞分泌,另外一部分Ghrelin來(lái)

5、源于小腸。它能夠與體內(nèi)的GHSR結(jié)合,劑量依賴性的促進(jìn)生長(zhǎng)激素釋放,進(jìn)而通過(guò)GH/IGF-1軸介導(dǎo)其生物活性。眾多的研究表明,Ghrelin能夠明顯促進(jìn)胃腸蠕動(dòng),加快胃腸排空。對(duì)于膿毒癥引起的麻痹性腸梗阻, Ghrelin也有很好的療效。同時(shí),Ghrelin能夠明顯改善缺血再灌注大鼠胃腸道的潰瘍形成、組織充血及毛細(xì)血管通透性改變,降低血TNF-α濃度。
　　雖然已有研究表明UTI、GHL在膿毒癥時(shí)對(duì)臟器功能障礙均有改善作用,但針對(duì)

6、膿毒癥腸功能障礙的特異相關(guān)性研究較少,且作用相應(yīng)機(jī)制也不甚明了。鑒于膿毒癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中腸道功能的重要作用,本實(shí)驗(yàn)擬以內(nèi)毒素血癥大鼠為膿毒癥模型,觀察了UTI、GHL對(duì)其小腸屏障功能、運(yùn)動(dòng)功能及全身和腸道局部炎癥反應(yīng)的影響,以期為膿毒癥時(shí)腸功能障礙的治療提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　將所有大鼠采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為5組(n=12),對(duì)照組(CON組)、內(nèi)毒素組(LPS組)、烏司他丁組(UTI組)、Ghrelin組(G

7、HL組,)、UTI+Ghrelin組(UTI+GHL組)。大鼠以3%的戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔麻醉。各實(shí)驗(yàn)組麻醉后,以內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide,LPS,15mg/kg)腹腔注射構(gòu)建內(nèi)毒素血癥模型,CON組以等量生理鹽水代替內(nèi)毒素腹腔注射。在LPS注射后10min,UTI組以UTI15萬(wàn)U/kg腹腔注射, GHL組給予Ghrelin25μg/kg腹腔注射,UTI+GHL組給予UTI15萬(wàn)U/kg+Ghrelin

8、25μg/kg腹腔注射,CON、LPS組給予同等劑量生理鹽水。各組12h后再次給藥。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后12h和24h分別處死6只大鼠,采用HE染色、RealTime-PCR、小腸葡聚糖藍(lán)-2000(BD-2000)推進(jìn)率和ELISA等方法觀察各組大鼠小腸屏障功能、小腸運(yùn)動(dòng)功能以及炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6、HMGB1等變化。
　　結(jié)果:
　　HE染色結(jié)果顯示UTI+GHL組、UTI組與LPS相比能不同程度減輕回腸結(jié)構(gòu)損傷,且

9、UTI+GHL組更明顯(P<0.05)。UTI組和UTI+GHL組在RD-5和TFF3 mRNA表達(dá)水平方面較LPS組有顯著提高(P<0.05),且UTI+GHL組升高明顯(P<0.05)。GHL組和UTI+GHL組較LPS組小腸運(yùn)動(dòng)功能均顯著升高,且UTI+GHL組更為明顯(P<0.05)。UTI+GHL組、UTI組、GHL組與LPS相比均能顯著降低TNF-α、IL-6、HMGB1等炎癥因子表達(dá)(P<0.05),且在腸粘膜組織中發(fā)現(xiàn)了

10、類似結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)觀察膿毒癥時(shí)小腸粘膜微結(jié)構(gòu)損傷程度以及RD-5和TFF3mRNA表達(dá)水平變化,證實(shí) UTI和Ghrelin聯(lián)用能明顯改善腸道內(nèi)皮細(xì)胞免疫功能,保護(hù)腸黏膜屏障,有效緩解膿毒癥癥狀,減緩膿毒癥病情的發(fā)展。其次UTI聯(lián)合Ghrelin能夠有效降低膿毒癥大鼠全身及腸粘膜炎性因子的過(guò)度激活與釋放使得腸道功能得到改善。腸屏障結(jié)構(gòu)和功能的損害,必然導(dǎo)致腸運(yùn)動(dòng)功能的減弱。因而,雖然本實(shí)驗(yàn)未觀察到膿毒