高爾夫球場狗牙根葉斑病病原學(xué)的研究.pdf

1、狗牙根草坪葉斑病是發(fā)生在高爾夫球場上的一種重要病害。2003-2005年，從湖北省武漢市金銀湖高爾夫球場與紅蓮湖高爾夫球場上采集狗牙根草葉斑病標(biāo)本。對葉部病斑進(jìn)行組織分離，并將分離的菌株進(jìn)行單孢純化和致病性測定。對致病菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)與分子鑒定、生物學(xué)特性研究以及對四種草坪草的侵染過程觀察，研究結(jié)果如下。 1．形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果表明該菌株為澳大利亞平臍蠕孢（Bipolaris australiensis）。核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（rD

2、NA-ITS）序列測定的結(jié)果表明，該菌株與GenBank中登陸號為AY923860的澳大利亞旋孢腔菌（Cochliobolus australiensis）序列同源性達(dá)到99.61％。 2．致病性測定結(jié)果表明，菌絲塊接種及孢子懸浮液接種均能使健康植株葉片出現(xiàn)圓形或者不規(guī)則形褐色病斑，而且從病斑邊緣病健交界處又重新分離到該病原菌。綜合致病性測定和形態(tài)學(xué)及分子鑒定結(jié)果，確認(rèn)該病病原為Bipolaris australiensis，這

3、是中國關(guān)于澳大利亞平臍蠕孢在高爾夫球場狗牙根草坪草上引起葉斑病的首次報道。 3．寄主范圍測定結(jié)果表明，小麥、水稻、玉米、早熟禾、日本結(jié)縷草、高羊茅、黑麥草、匍匐剪股穎均為澳大利亞平臍蠕孢的寄主。 4．生物學(xué)特性研究結(jié)果表明，病原菌在15-35℃溫度范圍內(nèi)都能夠產(chǎn)孢，以20-30℃最為適宜。在10-30℃范圍內(nèi)隨著溫度的升高，產(chǎn)孢量逐漸增加，到30℃產(chǎn)孢量達(dá)到高峰。適合菌絲體生長的溫度為15-38℃，以25-35℃最為適宜

4、。40℃菌絲停止生長。pH值在2.76-10.75范圍內(nèi)菌絲體均能生長，其中以4.84-8.65最為適宜。在pH值在2.76-10.75范圍內(nèi)均可產(chǎn)孢，其中產(chǎn)孢最適宜pH值范圍為4.84-6.41，偏酸性條件下有利于產(chǎn)孢。在供試的7種碳源中，以甘露醇和乳糖菌絲體生長勢最好，以麥芽糖菌絲長勢最差。產(chǎn)孢量則以乳糖為最高，以蔗糖最低。在供試的7種氮源之中，NaNO<,3>最有利于菌絲生長，而菌絲體利用蛋白胨和甘氨酸效果最差。含KNO<,3>培

5、養(yǎng)基產(chǎn)孢量最高，含蛋白胨培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最低。 PDA平板毒力測定結(jié)果表明，10％多氧霉素B粉劑、25％阿米西達(dá)乳油、80％代森錳鋅粉劑、50％克菌丹粉劑、50％多菌靈粉劑、30％愛苗乳油、10％世高顆粒劑，其EC50依次為5912.965μg／ml、1135.283μg／ml、21.33029μg／ml、18.24744μg／ml、9.6468μg／ml、1.148368μg／ml、0.526344μg／ml。其中10％世高顆粒劑

6、抑菌效果最好，10％多氧霉素B粉劑抑菌效果最差。 5．將濃度為5×10<'6>個孢子／ml澳大利亞平臍蠕孢分生孢子懸浮液噴施于生長20d左右的雜交狗牙根、高羊茅、早熟禾、黑麥草、早熟禾等幾種草坪草活體葉片上，在23～25℃，Rh＝95％條件下?lián)嵊?。接種后不同時間點(diǎn)取樣，對樣品進(jìn)行組織透明、染色，觀察病原菌對寄主植物的侵染過程。結(jié)果表明，在四種寄主上接種后3h內(nèi)可以觀察到分生孢子的萌發(fā)，6h之內(nèi)可以觀察到附著胞的形成，在24h之內(nèi)