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1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文tPA參與視皮層發(fā)育可塑性關(guān)鍵期終止的機(jī)制研究姓名:鄭莎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專(zhuān)業(yè):眼科學(xué)指導(dǎo)教師:陰正勤20070501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文t P A 表達(dá)和活性在出生后的發(fā)育變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn):( 1 ) 在大鼠出生后1 周組視皮層未見(jiàn)t P A表達(dá)。( 2 ) t P A 在視皮層的表達(dá)量在可塑性關(guān)鍵期末期達(dá)峰值,到成年期表達(dá)最低;其活性隨著可塑性關(guān)鍵期高峰、末期、終止一直下降,并且下降趨勢(shì)逐漸增大,到成年則降
2、至最低水平。( 3 ) 在視皮層可塑性關(guān)鍵期高峰、末期、終止及成年階段,視皮層I I —I I I 層、Ⅳ、V 一Ⅵ層均可見(jiàn)t P A 陽(yáng)性神經(jīng)元,且主要分布在I I .I I I 層、Ⅳ層。( 4 ) 在發(fā)育過(guò)程中,視皮層I I .I I I 層的t P A 陽(yáng)性細(xì)胞密度在可塑性關(guān)鍵期末期才達(dá)到最大值,隨后下降,到成年期至最低;分布在I v 層的t P A 陽(yáng)性細(xì)胞密度在關(guān)鍵期高峰即達(dá)到最大值,隨即下降,到成年期至最低。2 、應(yīng)用免疫
3、熒光組織化學(xué)技術(shù)雙重標(biāo)記t P A 和P N N s 、t P A 和G A B A 能神經(jīng)元,免疫印跡方法檢測(cè)G A D 6 5 ( 合成G A B A 抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的限速酶之一) 的發(fā)育變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):( 1 ) G A B A 能抑制性神經(jīng)傳遞系統(tǒng)和P N N s 的發(fā)育在結(jié)構(gòu)上同步趨于成熟,均呈持續(xù)增加趨勢(shì),并在關(guān)鍵期末期有一顯著增加過(guò)程;而t P A 陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)在關(guān)鍵期末期達(dá)高峰,隨后則一直呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)。( 2 )
4、從視皮層可塑性末期、終止、到成年的發(fā)育階段,視皮層t 剛P N N s 、t P ⅣG A B A 雙重標(biāo)記陽(yáng)性神經(jīng)元的發(fā)育具有相同的顯著下降變化趨勢(shì),到關(guān)鍵期終止期,這兩類(lèi)神經(jīng)元均降至成年的低水平;與t P A 陽(yáng)性神經(jīng)元的發(fā)育變化相似。3 、應(yīng)用腦片膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)結(jié)合免疫組化技術(shù),研究外源性調(diào)控t P A ( 外源性給予t P A 或其抑制物t P A —s t o p 浸浴作用于視皮層腦片) 對(duì)可塑性關(guān)鍵期終止前后的大鼠枕葉
5、腦片視皮層I V 層P N N s 的作用及其對(duì)I V 層神經(jīng)元G A B A A —I P s c s 特性的影響。結(jié)果如下:( 1 ) 外源性t P A 、t P A —s t o p 浸浴對(duì)P w3 、P w5 、P w7 各周齡視皮層腦片I V層P N N s 的數(shù)量無(wú)影響,但t P A 浸浴對(duì)P N N s 的形態(tài)卻發(fā)揮了明顯的降解作用。( 2 ) 外源性調(diào)控t P A 對(duì)不同周齡大鼠視皮層腦片I V 層神經(jīng)元被動(dòng)膜學(xué)特征及P
6、 S C s 的電學(xué)指標(biāo)無(wú)顯著影響。( 3 ) t P A 浸浴能明顯降低視皮層腦片I V 層神經(jīng)元G A B A A —I P S C s 的復(fù)極化時(shí)間、反應(yīng)峰值和I P S c s 摩S C s 峰值比率,而t P A —s t o p 浸浴對(duì)三者則無(wú)影響。( 4 ) t P A 浸浴使視皮層I v 層神經(jīng)元G A B A A —I P S c s 復(fù)極化時(shí)問(wèn)、G A B A A —I P S c s 峰值、I P S C s /P
7、 S C s 峰值比率的發(fā)育曲線均發(fā)生后移;t P A —s t o p 浸浴則使上述三條發(fā)育曲線前移。綜上所述,本課題得到以下結(jié)論:1 、首次揭示了出生后視皮層t P A 表達(dá)及活性在可塑性關(guān)鍵期終止前后的發(fā)育變化,證明t P A 參與了視皮層可塑性關(guān)鍵期的“終止”。2 、從關(guān)鍵期末期( P W 5 ) 開(kāi)始,P N N s 與G A B A 能抑制性神經(jīng)傳遞系統(tǒng)的發(fā)育同步趨于成熟,而t P A 陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)隨發(fā)育大幅下調(diào)。率先在組
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