酒精性肝病中蛋白酶體活性抑制與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激間相關(guān)性的體外實驗研究.pdf

1、目的：通過建立體外酒精性肝病模型，檢測酒精性肝病中蛋白酶體活性的變化，分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulation protein78，GRP78)的基因表達(dá)變化，并測定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(triglycercide，TG)含量的變化，做蛋白酶體活性與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物的相關(guān)性分析。探討研究酒精性肝病中蛋白酶體活性抑制與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的相關(guān)性。
　　 方法：乙醇處理HepG2細(xì)胞建立酒精性肝損體外模型，設(shè)立

2、對照組（培養(yǎng)基DMEM處理）、乙醇處理組(調(diào)整乙醇終濃度為150mmol/L)、蛋白酶體活化劑樺木酸處理組（樺木酸終濃度為20μmol/L）及樺木酸加乙醇共同處理組（二者終濃度分別為20μmol/L、150mmol/L），應(yīng)用實時定量PCR法測定各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78基因表達(dá)水平的變化，采用熒光底物法測定蛋白酶體活性（S-LLVY-AMC測定蛋白酶體糜蛋白酶樣活性），GPO-POD酶法測定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量。并做蛋白酶體活性變化

3、與GRP78基因變化的相關(guān)性分析以及GRP78基因表達(dá)變化與甘油三酯含量的相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：乙醇組（相比對照組）GRP78基因表達(dá)水平明顯升高，細(xì)胞內(nèi)TG含量增多，蛋白酶體活性降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；樺木酸組（相比對照組）GRP78基因表達(dá)降低，細(xì)胞內(nèi)TG含量降低，蛋白酶體活性增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；乙醇加樺木酸組（相比對照組）GRP78基因表達(dá)增多，TG含量增多，蛋白酶體活性降低，差

4、異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；乙醇加樺木酸組（相比乙醇組）GRP78基因表達(dá)降低，TG含量減少，蛋白酶體活性增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。相關(guān)性分析顯示蛋白酶體活性與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78基因表達(dá)含量在0.01水平上呈負(fù)相關(guān)，GRP78基因表達(dá)含量與TG含量在0.01水平上呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：蛋白酶體活性抑制可參與誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生，蛋白酶體活性的變化與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的嚴(yán)重程度呈一定負(fù)相關(guān)性。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可進(jìn)