慢性血漿皮質(zhì)酮升高對(duì)AOM-DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)直腸癌的影響.pdf

1、應(yīng)激與腫瘤的關(guān)系是目前關(guān)注的熱點(diǎn)。糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoids，GCs)是體內(nèi)最重要的應(yīng)激激素，既有強(qiáng)大的免疫抑制作用，又能通過(guò)改變腫瘤的微環(huán)境間接影響腫瘤的生物學(xué)行為，還能直接調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲。除了應(yīng)激時(shí)體內(nèi)的GCs水平增高，GCs在臨床治療中亦廣泛應(yīng)用，不僅是多種慢性疾病的長(zhǎng)期用藥，也是多種實(shí)體腫瘤化療期間的輔助用藥，因此有必要深入了解GCs對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展與許多因素有關(guān)，炎癥被認(rèn)

2、為是促進(jìn)結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。盡管已有研究觀察了GCs對(duì)結(jié)直腸癌的影響，但是目前的研究主要是采用體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，或者使用免疫缺陷小鼠完成，因此GCs在免疫系統(tǒng)正常的小鼠體內(nèi)是如何影響結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的至今仍不甚明確。
　　目的：構(gòu)建氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)/葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate，DSS)誘導(dǎo)C57BL/6雄性小鼠自發(fā)結(jié)直腸癌模型，從大體形態(tài)及組織病理學(xué)兩方

3、面研究血漿皮質(zhì)酮水平升高對(duì)自發(fā)小鼠結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法：
　　1.小鼠結(jié)直腸癌模型構(gòu)建:第1天C57BL/6雄性小鼠腹腔注射AOM12.5mg/kg，7天后予2.5％ DSS飲水連續(xù)5天，更換蒸餾水14天，重復(fù)DSS/蒸餾水飲水2個(gè)循環(huán)，期間觀察記錄小鼠體重、糞便性狀及糞便隱血情況并計(jì)算疾病活動(dòng)指數(shù)。第78天眼眶采血后使用放射免疫法檢測(cè)血漿皮質(zhì)酮水平，處死小鼠解剖分離結(jié)直腸，評(píng)估腫瘤大體情況及病理學(xué)觀察。

4、>　　2.皮質(zhì)酮干預(yù):第三輪DSS飲水結(jié)束后1周，通過(guò)皮質(zhì)酮水溶液(50mg/L)飲水和皮下植入皮質(zhì)酮緩釋劑（7.5mg-60天）兩種方式干預(yù)結(jié)直腸癌模型小鼠。31天后眼眶采血后使用放射免疫法檢測(cè)血漿皮質(zhì)酮水平，處死小鼠解剖分離結(jié)直腸，游標(biāo)卡尺測(cè)量結(jié)直腸腫瘤大小并計(jì)數(shù)，評(píng)估實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腫瘤大體形態(tài)，包括每只小鼠負(fù)荷腫瘤數(shù)目、面積和體積，兩組所有負(fù)荷腫瘤大小分布。結(jié)直腸癌組織切片H&E染色病理觀察并進(jìn)行炎癥評(píng)分;免疫組化檢查與腫瘤炎癥和

5、增殖等相關(guān)的五種蛋白質(zhì)，包括PCNA、p-STAT3、Bcl-xL、NF-κB(p65)和COX-2.
　　結(jié)果：
　　1.模型組小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)顯著高于對(duì)照組(2.93vs.0)，模型小鼠死亡率為10％，結(jié)直腸成瘤率為88.9％，病理證實(shí)為結(jié)直腸腺癌，而對(duì)照組小鼠無(wú)死亡，腸道無(wú)腫瘤生成。
　　2.皮質(zhì)酮飲水干預(yù)模型小鼠，皮質(zhì)酮組較對(duì)照組的血漿皮質(zhì)酮水平明顯升高（123.7ng/ml vs.80.95ng/ml，P＜0

6、.05），兩組小鼠一般情況未見明顯差異。兩組所有負(fù)荷腫瘤大小分布未見差異（P＞0.05），但皮質(zhì)酮組較對(duì)照組平均每只小鼠負(fù)荷腫瘤腫瘤數(shù)目明顯增多(13.38 vs.7.88，P＜0.01)，負(fù)荷腫瘤面積(100.7mm2vs.48.28 mm2，P＜0.01)及體積（133.6mm3 vs.60.26 mm3，P＜0.05）顯著增大。皮質(zhì)酮組病理觀察腫瘤周圍腸道炎癥評(píng)分較對(duì)照組顯著降低（2.41vs.1.3，P＜0.01）。NF-κB(

7、p65)、PCNA、p-STAT3、Bcl-xL和COX-2在兩組間表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　3.皮質(zhì)酮皮下植入干預(yù)模型小鼠，皮質(zhì)酮組與對(duì)照組的血漿皮質(zhì)酮水平無(wú)明顯差異。兩組小鼠大體形態(tài)和病理觀察結(jié)果亦未見顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)直腸癌模型是一種穩(wěn)定可靠的自發(fā)腫瘤模型，適宜用于結(jié)直腸癌的深入研究。
　　2.皮質(zhì)酮飲水可顯著升高模型小鼠血漿皮質(zhì)酮水平。皮質(zhì)