下牙槽神經(jīng)缺失對下頜骨骨缺損骨痂血腫期炎癥因子表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、在骨缺損愈合過程中,神經(jīng)系統(tǒng)一直參與調(diào)控骨痂的纖維化、軟骨形成、骨礦化改建等過程,尤其是通過周圍神經(jīng)末梢分泌的神經(jīng)肽與局部其他細(xì)胞因子共同作用于局部骨痂組織,影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的分化和功能,完成對新骨形成和改建的調(diào)控作用[1-2]。近年來的研究證實,降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitoningene-relatedpeptideCGRP)是周圍神經(jīng)分泌的神經(jīng)肽之一,在新骨形成改建過程中發(fā)揮著重要作用[3]。本課題組前期研究證實,下牙槽神

2、經(jīng)(InferioralveolarnerveIAN)能夠通過CGRP調(diào)控NO/NOi、OPG/RANKL等細(xì)胞信號通路,影響局部骨痂改建、新骨形成,從而影響下頜骨骨缺損的愈合[4-5]。
　　炎癥是機體對損傷因子的一種病理性防御反應(yīng),在局部骨缺損處的血腫形成新骨的過程中,炎癥因子始終以自分泌和旁分泌的形式,參與控制骨痂的改建[6]。下牙槽神經(jīng)缺失是否影響早期神經(jīng)肽CGRP分泌?CGRP表達(dá)變化是否影響骨痂血腫期炎癥因子的表達(dá)變化

3、?國內(nèi)外還鮮有報道,本研究通過建立失IAN和保留IAN兔下頜骨骨缺損動物模型[7],探討CGRP對骨缺損骨痂血腫期炎癥因子的影響,進(jìn)一步探討周圍感覺神經(jīng)調(diào)控骨缺損愈合的可能機制,并檢測下頜骨骨缺損血腫周圍局部骨組織中,腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及其mRNA表達(dá)和神經(jīng)肽CGRP的表達(dá),探討周圍神經(jīng)系統(tǒng)對下頜骨骨缺損愈合影響的可能機制。
　　方法:
　　1、實驗動物及分組<

4、br>　　成年中國大白兔50只,體重1.9kg~2.1kg,雌雄不限,由第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院實驗動物中心提供。實驗動物隨機分為實驗組和對照組,實驗組為左下牙槽神經(jīng)缺失并左下頜骨骨缺損;對照組為單純左下頜骨骨缺損,實驗時間點設(shè)為1d、2d、3d、5d、7d,在實驗時間點快速處死實驗動物,快速切取骨缺損區(qū)周圍2mm骨組織,液氮保存待用。
　　2、ELISA法檢測實驗組和對照組不同實驗時間點IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)。

5、　　3、熒光realtime-PCR法檢測實驗組和對照組不同實驗時間點IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)。
　　4、HE染色觀察實驗組和對照組不同實驗時間點局部骨痂組織變化,免疫組化法檢測實驗組和對照組不同實驗時間點局部骨痂周圍骨組織CGRP表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.ELISA法檢測IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)
　　1.1IL-1β表達(dá):骨缺損后1d,實驗組表達(dá)降低,與對照組相比具有非常顯著差

6、異(P<0.01);2d實驗組明顯低于對照組(P<0.05),表達(dá)有顯著差異(P<0.05);5d時實驗組表達(dá)高于對照組,相比有顯著差異(P<0.05);3d、5d兩組相比無明顯差異。
　　1.2IL-6表達(dá):骨缺損后1d,IL-6實驗組表達(dá)降低,與對照組相比具有非常顯著差異(P<0.01);骨缺損后2d,實驗組表達(dá)低于對照組,兩組相比有顯著差異(P<0.05);3d、5d、7d兩組之間無明顯差異。
　　1.3TNF-α表達(dá)

7、:骨缺損后1d,實驗組表達(dá)低于對照組,兩組之間具有非常顯著差異(P<0.01);2d時兩組之間無顯著差異,實驗組表達(dá)升高,對照組表達(dá)降低,而實驗組與1d實驗組相比,具有非常明顯差異;3d實驗組表達(dá)低于對照組,兩組相比具有顯著差異(P<0.05);5d實驗組表達(dá)高于對照組,兩組相比具有顯著差異(P<0.05),7d時則無明顯差異。
　　2.熒光realtime-PCR法檢測IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)
　　2.

8、1IL-1βmRNA表達(dá):1d、2d、3d實驗組與對照組相比,表達(dá)降低,具有非常顯著差異(p<0.01);5d實驗組高于對照組,兩組相比表達(dá)具有顯著差異(p<0.05);7d兩組表達(dá)無明顯差異。
　　2.2IL-6mRNA表達(dá):1d、2d、3d、5d實驗組表達(dá)低于對照組,具有非常顯著差異(p<0.01);7d兩組表達(dá)相比無明顯差異;隨時間延長兩組表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢。
　　2.3TNF-αmRNA表達(dá):1d實驗組表達(dá)低于對照組,

9、具有非常顯著差異(p<0.01);2d、5d兩組相比表達(dá)具有顯著差異(p<0.05);3d、7d兩組相比表達(dá)無明顯差異;二組隨實驗時間的延長,表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢。
　　3.HE染色:1d,實驗組和對照組骨缺損區(qū)充滿血細(xì)胞,邊緣可見大量炎性細(xì)胞出現(xiàn);2d實驗組骨缺損區(qū)邊緣可見由纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)組織出現(xiàn),較對照組少,其間散在大量的炎性細(xì)胞;3d骨缺損區(qū)邊緣纖維組織進(jìn)一步增寬,血細(xì)胞量減少,對照組內(nèi)血細(xì)胞基本吸收完畢,由纖維組織代替;5d實驗

10、組骨缺損區(qū)纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)較對照組寬;7d實驗組大量纖維組織增生,有少量編織骨形成,成熟度不高,中心位置還有少量纖維組織,對照組已完全由結(jié)締組織代替,可見在成纖維細(xì)胞簇集的部位有少量的骨基質(zhì)沉積,較多的編織骨形成。
　　4.免疫組化法檢測CGRP(AOD)表達(dá):1d、3d、7d實驗組表達(dá)與對照組相比,具有顯著差異(p<0.05);2d、5d兩組相比具有非常顯著差異(p<0.01);各實驗時間點實驗組表達(dá)鈞低于對照組。
　　結(jié)論: