汕頭市區(qū)2004年急性上呼吸道感染患兒流感病毒的監(jiān)測.pdf

1、背景與目的:
　　急性上呼吸道感染(acute upper respiratory infection,AURI)是人類最常見的疾病之一,兒童發(fā)病率很高。在我國,城市兒童每年平均患病3~6次,農村兒童每年平均患病2~5次。AURI嚴重時易并發(fā)中耳炎、鼻竇炎、淋巴結炎、支氣管炎及肺炎等,甚至引起死亡。因此,AURI是一種不容忽視的綜合癥。流感病毒是AURI最常見的病原體之一。
　　流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病,

2、其起病急,蔓延快,對人群尤其是兒童、老年人及免疫缺陷者造成很大的危害。流感病毒點突變造成的抗原漂移可導致流感每年的季節(jié)性流行,而基因重配造成的抗原轉換則可能產生新的亞型,因人類對新亞型普遍缺乏免疫力而可能導致流感世界大流行。自1997年香港高致病性H5N1禽流感病毒直接感染人事件以來,截至2006年5月18日,全世界共發(fā)生216例H5N1禽流感病毒直接感染人事件,其中122人死亡。禽流感病毒可能導致下一次流感世界大流行。
　　我國

3、華南地區(qū)因為特殊的地理位置、氣候環(huán)境和農業(yè)生產方式,使得流感病毒常年在此地區(qū)流行,加之1957年爆發(fā)的“亞洲流感”和1968年爆發(fā)的“香港流感”兩次世界性大流感均起源于該地區(qū),因此國際學術界普遍認為華南地區(qū)是“世界流感流行中心”(epicenter)。因此,在華南地區(qū)開展長期而系統(tǒng)的流感病毒流行病學調查,加強在人群尤其是高危人群中對流感病毒的監(jiān)測對于流感流行的防治和疫苗接種策略的評估以及下一次流感世界大流行的防治具有十分重要的理論價值和

4、實際意義。汕頭市是我國華南地區(qū)典型城市之一,2004年1月至2004年12月期間我們在汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院兒科門診共采集1342份急性上呼吸道感染病人咽拭子標本,應用細胞培養(yǎng)-血凝抑制試驗進行檢測。
　　流行性感冒病人癥狀可表現為發(fā)熱、頭痛、身體不適、食欲減退、咳嗽、寒戰(zhàn)、肌肉酸痛及咽喉疼痛等等。然而,其他的一些呼吸道疾病病原體如呼吸道合胞病毒,副流感1-4型,腺病毒以及鼻病毒也會導致流感樣癥狀。因此,流感病毒檢測技術對于流

5、感的診斷,早期治療以及流感疫情的監(jiān)測起著十分重要的作用。流感病毒的檢測主要包括血清學檢測和病原學檢測兩方面,其中血清學檢測以血凝(HA)及血凝抑制(HI)為主,為 WHO推薦的流感病毒型與亞型鑒定方法;病原學檢測則以PCR為主,PCR作為日益發(fā)展成熟的體外基因擴增技術,已廣泛應用于流感病毒的基因檢測和分子流行病學調查。本實驗應用RT-PCR以及細胞培養(yǎng)-血凝抑制試驗對部分人流感臨床標本進行分別檢測并將兩者結果進行比較。
　　材料和

6、方法:
　　從汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院兒科門診采集急性上呼吸道感染兒科患兒的咽拭子標本,冰浴送至實驗室,常規(guī)加雙抗(青霉素和鏈霉素),4℃作用至少2h后進行接種傳代MDCK細胞。MDCK細胞培養(yǎng)瓶長成單層后,每管接種0.5ml標本,每個標本接種2管,置33℃孵育,每天用倒置顯微鏡觀察致細胞病變效應(CPE),當出現CPE時,按常規(guī)血凝試驗(HA)檢測細胞維持液中的紅細胞凝集活性。將收獲的有紅細胞凝集活性(血凝滴度≥16)的維持液

7、與特異性免疫血清進行血凝抑制試驗,通過血凝抑制試驗鑒定病毒亞型(H1、H3或B型),如果H1、H3亞型和B型陰性時,用H9、H7和H5亞型標準血清進行血凝抑制試驗檢測相應亞型病毒株。用 Qiagen RNA提取試劑盒提取標本流感病毒RNA后,逆轉錄合成cDNA,以流感病毒M基因為模板進行PCR反應擴增,最后用瓊脂糖凝膠電泳檢測目標產物。應用SPSS11.5版本對部分實驗結果進行分析處理。
　　結果:
　　1.2004年134

8、2份標本細胞培養(yǎng)血凝法檢出陽性標本142例,總陽性率為10.58％,其中H3亞型121例,B型21例,未分離到H1亞型;未分離到H5、H7和H9亞型禽流感病毒株。全年中4月份和9月份陽性率達到最高。
　　2.嬰兒期、幼兒期、學齡前期、學齡期和青春期的流感病毒分離陽性率分別是2.54%、3.92%、9.68%、25.52%和33.33%,學齡前期、學齡期和青春期陽性率比嬰兒期和幼兒期顯著增高(P<0.01)。
　　3.411份

9、標本用RT-PCR方法檢出陽性標本70份,陽性率17.03%;而細胞培養(yǎng)血凝抑制法檢出陽性標本44份,陽性率為10.71%。RT-PCR檢出陽性率比細胞培養(yǎng)血凝抑制法檢出陽性率顯著高(P<0.01)
　　結論:
　　1.2004年汕頭市區(qū)人流感主要見于H3亞型,B型次之,H1亞型未見;人群中未見感染H5、H7或H9亞型禽流感病毒。4月份和9月份為該年汕頭市區(qū)流感發(fā)病高峰期。
　　2. H3亞型在2~7月為優(yōu)勢株,在8月