危害核桃的成團(tuán)泛菌及其系統(tǒng)進(jìn)化分析.pdf

1、核桃（Juglans regia）是世界范圍內(nèi)栽培的重要木本油料樹種。伴隨著我國核桃產(chǎn)業(yè)化的快速發(fā)展，核桃栽培面積不斷擴(kuò)大，由于栽培管理水平參差不齊，致使核桃病害問題日漸突出。核桃黑斑?。╓alnut blight）和褐色頂端壞死?。˙rown apical necrosis）是危害我國核桃的主要病害，嚴(yán)重影響核桃產(chǎn)量和質(zhì)量，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans）是引起核桃黑斑病和褐色頂端壞死病的病原之

2、一。為明確危害核桃的成團(tuán)泛菌的分類地位、遺傳多樣性及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，本研究以核桃黑斑病和褐色頂端壞死病病果上分離到的成團(tuán)泛菌為供試菌株，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)學(xué)和形態(tài)學(xué)觀察，生化特性測定，致病性測定，通過多位點(diǎn)序列分析（MLSA）研究其分類地位，利用BOX-PCR和ERIC-PCR對(duì)供試菌株的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：
　?。?）在全國4個(gè)核桃分布區(qū)的9個(gè)樣地采集核桃黑斑病和褐色頂端壞死病病果樣本，分離得到54株成團(tuán)泛菌菌株，對(duì)其形

3、態(tài)學(xué)、生化特性和致病性進(jìn)行了觀察和測定。形態(tài)學(xué)觀察表明，供試菌株菌體直桿狀，聚集生長，菌體大小為0.9-3.0μm×0.6-1.2μm，4-6根周生鞭毛；革蘭氏染色陰性，可水解淀粉，甲基化陽性，葡萄糖氧化代謝產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。全部菌株的形態(tài)學(xué)特征和生理生化特性符合成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans）的特征，接種可引起核桃黑斑病和核桃褐色頂端壞死病典型癥狀。
　　（2）對(duì)供試54個(gè)菌株的16S rDNA序列以及24個(gè)菌株的f

4、usA、leuS、gyrB、rpoB基因的多位點(diǎn)序列進(jìn)行同源性分析比較，顯示上述菌株與已知成團(tuán)泛菌16S rDNA序列以及fusA、leuS、gyrB、rpoB基因序列的同源性皆達(dá)到99％以上。
　　16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，全部供試菌株與成團(tuán)泛菌模式菌株P(guān)antoea agglomeransT聚為一個(gè)獨(dú)立的分枝，但對(duì)成團(tuán)泛菌種內(nèi)的區(qū)分度較低。
　　多基因串聯(lián)分析系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，24個(gè)供試菌株與成團(tuán)泛菌的模式菌株LMG

5、1286T以及菌株EH318聚為一個(gè)分支。24株供試菌株被分為6組，A組包括來自陜西省商洛市（SXS）的5個(gè)菌株以及來自甘肅省隴南市武都區(qū)的GSC菌株。B組包括來自貴州省畢節(jié)市赫章區(qū)的2個(gè)菌株。C組包括來自山東省濟(jì)寧市尼山鎮(zhèn)的NSA、NSB菌株，來自甘肅省天水市秦城區(qū)的TSA菌株，以及來自山東省濟(jì)寧市泗水縣的3個(gè)菌株。D組包括來自甘肅省天水市清水縣的3個(gè)菌株菌株。E組包括來自甘肅省隴南市武都區(qū)的GSA、GS B菌株。F組包括來自山東省濟(jì)

6、寧市汶上縣的WSA菌株以及來自山東省泰安市山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)實(shí)驗(yàn)站的4個(gè)菌株。外群大腸桿菌（Escherichia coli）菌株ATCC11775T被單獨(dú)聚為一個(gè)分支，泛菌屬內(nèi)與成團(tuán)泛菌親緣關(guān)系密切的P. ananatis、P. dispersa、P. stewartii參考菌株被各自單獨(dú)聚類。多位點(diǎn)序列分析可對(duì)成團(tuán)泛菌進(jìn)行有效的種內(nèi)區(qū)分，供試菌株的分組情況與其地理來源有一定的相關(guān)性。
　?。?）對(duì)54株成團(tuán)泛菌進(jìn)行ERIC-PC

7、R和BOX-PCR，擴(kuò)增產(chǎn)物的大小范圍從約150bp至約5000bp。BOX-PCR和ERIC-PCR擴(kuò)增出799條條帶，多態(tài)性條帶為656條，多態(tài)性比例為82.21%；ERIC-PCR和BOX-PCR聚類分析顯示，當(dāng)λ=0.69時(shí)可將供試菌株分為4組，在分子水平上表明了成團(tuán)泛菌的遺傳多樣性和親緣關(guān)系，其遺傳多樣性與地理來源具有一定的相關(guān)性。
　?。?）對(duì)成團(tuán)泛菌9個(gè)居群的菌株進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)、多樣性及地理來源分析。9個(gè)居群的成團(tuán)泛菌