胰腺癌分泌的組織蛋白酶-D致肝預轉(zhuǎn)移小生境形成的初步研究.pdf

1、目的:研究胰腺癌分泌的組織蛋白酶-D是否能誘導腫瘤肝臟預轉(zhuǎn)移小生境的形成，并檢測預轉(zhuǎn)移小生境的構成成分，為今后進一步研究胰腺癌肝轉(zhuǎn)移預轉(zhuǎn)移小生境的形成機制奠定基礎。
　　方法:采用來源于同一親本的具有相同遺傳背景篩選獲得的、具有不同肝轉(zhuǎn)移潛能的人胰腺癌細胞株13.6pl及Colo357分別建立裸鼠原位移植瘤模型，并根據(jù)裸鼠接種腫瘤細胞株的種類將裸鼠分為L3.6pl組、Colo357組及假手術空白對照組，于腫瘤的預轉(zhuǎn)移期將實驗裸鼠處

2、死，通過WesternBlot、RT-PCR檢測上述各組裸鼠預轉(zhuǎn)移肝臟中S100A8、S100A9的蛋白及mRNA水平變化，流式細胞檢測并比較上述三組裸鼠肝臟中CD11b+的骨髓衍生細胞的數(shù)量，確定胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的預轉(zhuǎn)移小生境形成。提取L3.6pl、Colo357細胞的條件培養(yǎng)基、重組組織蛋白酶D（cath-d）及RPMI1640，將其通過尾靜脈注射入裸鼠體內(nèi)，建立起無瘤荷的預轉(zhuǎn)移模型:L3.6pl組、Colo357組、Cath-d組及空

3、白對照組，使用WesternBlot、RT-PCR及流式細胞術檢測上述上述各組裸鼠肝臟中預轉(zhuǎn)移小生境的形成情況。
　　結果:高肝轉(zhuǎn)移潛能L3.6pl組裸鼠肝臟中S100A8、S100A9mRNA表達及蛋白表達水平明顯高于Colo357組及空白對照組(p＜0.05)，其中S100A8mRNA的相對表達量為空白對照組的167％±11.1％，S100a9為163％±5.90％;而Colo357組與空白對照組無明顯差異(p＞0.05)。流

4、式細胞檢驗提示L3.6pl組中CD11b陽性BMDCs數(shù)量明顯高于Colo357組及空白對照組(p＜0.05)，而Colo357組與空白對照組間無明顯差異(p＞0.05)，其中L3.6pl組裸鼠肝臟中的CD11b陽性BMDC占肝臟細胞總數(shù)的2.60％±0.0578％;Colo357組僅占0.433％±0.145％;而空白對照組中僅占0.200％±0.0578％。無瘤荷的L3.6pl組裸鼠肝臟中S100A8、S100A9mRNA表達及蛋白

5、表達水平較Colo357組及空白對照組明顯提高(p＜0.05);Cath-D組裸鼠肝臟中的S100A8、S100A9mRNA表達及蛋白表達水平高于Colo357組及空白對照組(p＜0.05);其中L3.6pl組S100A8mRNA的相對表達量為空白對照組的165％±4.82％，S100a9為163％±5.90％，Cath-d組S100A8mRNA的相對表達量為空白對照組的132％±4.71％，S100a9為129％±8.81％;而Col

6、o357組與空白對照組無明顯差異(p＞0.05)。L3.6pl組中肝臟中的CD11b陽性BMDC占肝臟細胞總量的2.07％，Cath-d組占1.52％，Colo357組僅有0.315％，空白對照組為0.150％，L3.6pl組及Cath-d組顯著高于空白對照組及Colo357組(p＜0.05)，而空白對照組與Colo357間無明顯差異(p＞0.05)。
　　結論:高肝轉(zhuǎn)移性潛能的胰腺癌細胞株L3.6pl分泌的Cath-d能誘導預轉(zhuǎn)