利用PCR技術(shù)對(duì)禾草內(nèi)生真菌進(jìn)行定性分析和定量測(cè)定.pdf

1、本研究選取內(nèi)生真菌特異性引物，成功建立了利用PCR技術(shù)對(duì)禾草中內(nèi)生真菌感染狀況的定性分析和定量測(cè)定的方法，并將此定量方法應(yīng)用到內(nèi)蒙古中東部草原不同地理種群羽茅內(nèi)生真菌感染量的測(cè)定中。通過(guò)對(duì)內(nèi)蒙古中東部草原不同地理種群羽茅內(nèi)生真菌感染狀況的調(diào)查，以及染菌狀況和生態(tài)因子的相關(guān)性分析，期望能夠解釋羽茅-內(nèi)生真菌共生體存在的原因，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)禾本科植物-內(nèi)生真菌之間的共生關(guān)系、更有效地保護(hù)和利用這一生物資源提供依據(jù)。 建立了利用PCR技

2、術(shù)對(duì)黑麥草中內(nèi)生真菌感染狀況的定性分析和定量測(cè)定的方法，并將此定性檢測(cè)方法與常規(guī)乳酸-苯胺藍(lán)染色法相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該方法檢測(cè)的敏感性和準(zhǔn)確性均高于后者。利用實(shí)時(shí)熒光PCR定量分析的結(jié)果表明：黑麥草葉鞘的含菌量普遍高于葉片；同株不同分蘗之間內(nèi)生真菌含量無(wú)顯著差異；不同植株之間內(nèi)生真菌含量差異較大。由此可見(jiàn)內(nèi)生真菌的含量不僅與植物種以及品種有關(guān)，也與植物的基因型密切相關(guān)。 2003年9月、2004年9月和2005年9月，對(duì)內(nèi)蒙古中

3、東部草原七個(gè)不同地理種群羽茅內(nèi)生真菌的感染率進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)各樣地連續(xù)三年羽茅在生長(zhǎng)季末期內(nèi)生真菌的感染率幾乎都達(dá)到100％，說(shuō)明在內(nèi)蒙古中東部草原羽茅與內(nèi)生真菌共生是較為普遍的現(xiàn)象。2005年7月調(diào)查羽茅染菌率的結(jié)果與9月的相比有顯著的差異，說(shuō)明羽茅中內(nèi)生真菌的感染率存在季節(jié)動(dòng)態(tài)。羽茅的染菌率可能與植株的成熟度有關(guān)。 從內(nèi)蒙古中東部草原四個(gè)樣地生長(zhǎng)的羽茅中，分離純化內(nèi)生真菌，并觀察其形態(tài)特征(菌落、菌絲、分生孢子、生長(zhǎng)速度等)，

4、初步鑒定它們?yōu)镹eotyphodium屬內(nèi)生真菌，并通過(guò)SSR-PCR方法進(jìn)一步證實(shí)了形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果。在野外考察過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)西烏珠穆沁旗和霍林郭勒樣地少數(shù)羽茅的花序和旗葉上有真菌子座，所以推測(cè)有些羽茅植株可能感染有性型Epichloё屬真菌。 為了進(jìn)一步研究羽茅-真菌共生體存在的原因，我們采用實(shí)時(shí)熒光PCR的方法測(cè)定了七個(gè)樣地染菌羽茅中內(nèi)生真菌的含量，并分析染菌量和氣候因子、土壤因子、羽茅生長(zhǎng)和生殖狀況的相關(guān)性。結(jié)果表明，羽茅