強(qiáng)啡肽在心肌缺血預(yù)處理時(shí)的變化及對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用.pdf

1、阿片肽和阿片受體在體內(nèi)廣泛分布，長(zhǎng)期以來人們一直認(rèn)為阿片肽是一種中樞神經(jīng)肽或神經(jīng)遞質(zhì)，僅在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用。近20 年來研究發(fā)現(xiàn)心臟也可合成內(nèi)源性阿片肽，通過自分泌或旁分泌的方式對(duì)自身功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，其作用是通過各自相應(yīng)的阿片受體所介導(dǎo)的。與心臟功能密切相關(guān)的阿片受體主要是μ、δ和к三種亞型，其中在心血管系統(tǒng)占主導(dǎo)地位的阿片受體亞型是к阿片受體，強(qiáng)啡肽(Dyn)是к阿片受體的內(nèi)源性配體。 研究證實(shí)，心肌缺血預(yù)處理(IPC)能夠

2、使心臟對(duì)隨后的持續(xù)的心肌缺血再灌注(I/R)損傷的耐受性提高，IPC 對(duì)缺血心肌的這種保護(hù)作用主要是由于缺血觸發(fā)釋放內(nèi)源性物質(zhì)實(shí)現(xiàn)的。已知在正常條件下，心臟可合成Dyn 并能激活κ阿片受體產(chǎn)生對(duì)心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用；在心肌缺血時(shí)，內(nèi)源性Dyn有可能釋放增多并通過激動(dòng)κ阿片受體參與心肌缺血的病理過程。因此本試驗(yàn)旨在研究?jī)?nèi)源性Dyn 是否在IPC 心肌保護(hù)作用中扮演重要的角色以及激活κ阿片受體是否對(duì)缺血再灌注心肌具有直接的保護(hù)作用。

3、 1、目的： （1）觀察在IPC 過程中，Dyn 在血漿水平的濃度變化以及Dyn 在心肌組織mRNA 表達(dá)的變化。 （2）給以κ阿片受體的選擇性激動(dòng)劑，觀察其對(duì)大鼠心肌I/R 損傷的影響。 （3）給以κ阿片受體的選擇性阻斷劑，觀察其對(duì)IPC 的心肌保護(hù)作用的影響。 2、研究方法： （1） IPC 模型制備方法：大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支（LAD）距左心耳下緣約2 mm 處穿線，套扎LAD，心肌缺血5 m

4、in，松開，再灌注5 min，3 個(gè)循環(huán)。 （2） I/R 模型制備方法：套扎LAD，心肌缺血45 min，松開，再灌注120 min。 （3）應(yīng)用生理學(xué)整體實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行大鼠血液的采集和心臟功能的測(cè)定。 （4）采用RT-PCR 方法觀察大鼠心肌組織Dyn mRNA 表達(dá)的變化。 （5）采用放射免疫分析方法測(cè)定血漿中Dyn，磷酸肌酸激酶（CK）和乳酸脫氫酶（LDH）的水平。 （6）應(yīng)用雙重染色法檢測(cè)

5、大鼠心肌梗死面積。 3、主要結(jié)果： （1）采集各組大鼠血液，離心取上層血漿，測(cè)定各組大鼠血漿中Dyn的濃度，IPC 組（缺血5 min，再灌注5 min，3 個(gè)循環(huán)后采樣）的濃度顯著高于同時(shí)間sham 組（不給予缺血和再灌注，其余處理同IPC 組）（ P<0.05）；IPC 組的濃度顯著高于con 組（未給予任何處理）（ P<0.05）。 （2）取大鼠心肌組織，觀察各組心肌組織Dyn mRNA 表達(dá)的變化，IPC

6、組（缺血5 min，再灌注5 min，3 個(gè)循環(huán)后采樣）強(qiáng)啡肽基因表達(dá)水平與同時(shí)間sham 組（不給予缺血和再灌注，其余處理同IPC組）和con 組（未給予任何處理）相比，無顯著差別（ P>0.05）。 （3）靜脈給予選擇性κ阿片受體激動(dòng)劑U50488H（1.5 mg/kg）發(fā)現(xiàn)，U50488H+I/R 組大鼠心肌梗死面積明顯低于I/R 組的大鼠心肌梗死面積（ P<0.01）；血漿中CK 和LDH 的含量也明顯降低（ P<0.0

7、1）。 靜脈給予選擇性κ阿片受體拮抗劑Nor-BNI（1.5 mg/kg），Nor-BNI+U50488H+I/R 組大鼠與I/R 組大鼠心肌梗死范圍無顯著性差異( P>0.05)，血漿中CK 和LDH 的含量也無顯著性差異( P>0.05)，但與U50488H+I/R 組大鼠心肌梗死范圍及血漿中CK 和LDH 相比，明顯升高( P<0.01)。 （4）各組以缺血30 min開始時(shí)為記錄起始點(diǎn)，分別記錄缺血0 min，缺

8、血10 min，缺血30 min，再灌注30 min時(shí)間點(diǎn)的左心室收縮壓（LVSP）及收縮功能（dp/dtmax）和舒張功能（-dp/dtmax），發(fā)現(xiàn)IPC＋I(xiàn)/R組在缺血10 min，缺血30 min，再灌注30 min時(shí)間點(diǎn)的LVSP和±dp/dtmax明顯高于同時(shí)間點(diǎn)的I/R組（ P<0.05）。靜脈給予κ阿片受體的特異性阻斷劑Nor-BNI（2 mg/kg），Nor-BNI＋I(xiàn)PC+I/R組在缺血10 min，缺血30 min

9、，再灌注30 min時(shí)間點(diǎn)的LVSP和±dp/dtmax明顯低于IPC+I/R組（ P<0.05）。 4、結(jié)論： (1) 本研究首次表明，IPC 可能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源性阿片肽Dyn 的釋放而增加了血漿Dyn 水平，后者可通過激活κ阿片受體產(chǎn)生對(duì)心臟的保護(hù)作用。 (2) 外源性阿片類物質(zhì)U50488H 激活κ阿片受體，能夠顯著降低I/R的心肌梗死面積，減少心肌細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的漏出，對(duì)I/R 心肌具有直接保護(hù)作用。