利用bcl-2基因治療慢性充血性心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來(lái)人們逐漸認(rèn)識(shí)到心肌細(xì)胞的反復(fù)丟失是心力衰竭進(jìn)程中最為重要的因素。而心肌細(xì)胞凋亡可能是其反復(fù)丟失的根源所在。同時(shí)因凋亡所致的心肌細(xì)胞死亡與病理性的心室重構(gòu)密切相關(guān)。因此對(duì)由于凋亡所致的心肌細(xì)胞數(shù)量減少的研究，逐漸成為心力衰竭研究的熱點(diǎn)。 細(xì)胞凋亡是受基因編碼調(diào)控的。許多基因參與凋亡的調(diào)控，目前研究表明，Bcl-2基因直接抑制細(xì)胞凋亡。鑒于此，運(yùn)用基因載體技術(shù)、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將bcl-2基因?qū)胨ソ叩男募?，可直接抑制心肌?xì)胞凋亡

2、，減少心肌細(xì)胞丟失，提高心臟功能。 [方法]本課題根據(jù)文獻(xiàn)采用腹主動(dòng)脈結(jié)扎法制備了慢性心衰模型，將模型動(dòng)物分為對(duì)照組及基因藥物心肌注射后1d、3d、7d組?；蛩幬镒⑸浣M用構(gòu)建的In-vivo-jetPEI-pCAGGS-GFP-bcl2DNA進(jìn)行心肌轉(zhuǎn)染，對(duì)照組注射等量的Invivo-jetPEI。采用激光共聚焦顯微鏡及抗體染色法觀察心肌切片中GFP、Cy3熒光的表達(dá)，以二步免疫組化法檢測(cè)Bcl-2基因蛋白的表達(dá)變化；以缺口末

3、端標(biāo)記法(TUNEL)標(biāo)記凋亡細(xì)胞；用多道生理記錄儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染動(dòng)物的心功能包括：心率(HR)、中心靜脈壓(CVP)、心輸出量(CO)、左室舒張末壓(LVEDP)等。 [結(jié)果] 1.帶有GFP報(bào)告基因的Bcl-2基因藥物，注射慢性心衰大鼠的心肌后，1天后取材，用激光共聚焦顯微鏡觀察，能明顯的看到GFP的表達(dá)，用Cy3二抗也能檢測(cè)到GFP較高表達(dá)的豐度。 2.慢性心衰模型動(dòng)物心肌組織細(xì)胞凋亡明顯增多，基因藥物心肌注射1

4、天、3天、7天各組與模型組相比，慢性心衰大鼠的凋亡發(fā)生率顯著降低。 3.慢性心衰模型動(dòng)物Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低，基因藥物心肌注射組1天、3天、7天組的Bcl-2蛋白表達(dá)與模型組相比有所增高。 4.基因藥物心肌注射組心臟功能有增高趨勢(shì)。 [結(jié)論] 1.慢性心衰模型動(dòng)物心肌組織細(xì)胞凋亡明顯增多，同時(shí)心功能下降。 2.慢性心衰模型動(dòng)物Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低。 3.GFP、Cy3熒光表達(dá)結(jié)