早發(fā)冠心病患者高密度脂蛋白(HDL)蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分早發(fā)冠心病患者的臨床、生化和冠脈造影特點
　　 研究目的:本研究通過將早發(fā)冠心病患者與老年冠心病及年齡相匹配的健康對照組比較，探討早發(fā)冠心病的臨床、生化和冠脈造影特點。
　　 研究方法
　　 1.研究對象：
　　 （1）為2008年11月至2009年6月就診于北京阜外心血管病醫(yī)院的患者423例，
　　 所有患者均有完整的病歷資料及冠狀動脈造影結(jié)果。
　　 （2）早發(fā)冠心病患者109

2、例（41.7±4.92歲），其中76例患者無心梗病史并且未服用他汀類及其他降脂類藥物；
　　 （3）老年冠心病為發(fā)病年齡大于55歲的患者；共238例（60.5±8.15歲），其中92例患者無心梗炳史并且未服用他汀類及其他降脂類藥物；
　　 （4）對照組為76例（40.6+5.9歲）與早發(fā)冠心病組年齡相匹配的健康人，其中45例為懷疑冠心病但冠脈造影正常的患者，31例為體檢排除冠心病患者，檢查項目包括：全面體格檢查、靜息心電

3、圖、活動平板心電圖、血生化及血常規(guī)、任何可疑冠心病、嚴(yán)重肝腎疾病及感染性疾病均從本研究中排除。
　　 2.觀祭指標(biāo)：
　　 （1）人口學(xué)特征：年齡、性別、體重指數(shù)；
　　 （2）體重指數(shù)：吸煙史、高血壓病史、糖尿病病史、早發(fā)冠心病家族史及心梗史；
　　 （3）實驗室指標(biāo)指標(biāo)：甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、載脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ

4、）、脂蛋白（a）（LP（a））、尿酸（Uric acid）和高敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）：
　　 （4）冠狀動脈造影特點：病變血管數(shù)量，各支冠脈病變的比率及冠脈狹窄程度的比較；
　　 研究結(jié)果
　　 1.與健康對照組相比，早發(fā)冠心病組中吸煙史、冠心病家族史、高血壓及糖尿病史顯著升高；HDL-C、apoA-I含量顯著降低，而TG、LP（a）和hsCRP水平升高。
　　 2.與老年冠心病組相比，早發(fā)冠心病組急

5、性心肌梗死的發(fā)生率明顯升高，早發(fā)冠心病常累及單支血管，而Gensini評分無顯著性差異；血清HDL-C和hsCRP低于老年患者組。
　　 研究小結(jié)
　　 1.HDL-C及apoA-Ⅰ在早發(fā)冠心病組顯著降低，可能與早發(fā)冠心病發(fā)病有關(guān)；
　　 2.吸煙、糖尿病、高血壓、冠心病陽性家族史可能與早發(fā)冠心病發(fā)病有關(guān)；
　　 3.早發(fā)冠心病的hSCRP明顯高于健康對照組及老年冠心病組，但本研究種還不能用hsCRP作為

6、評價冠脈狹窄程度的指標(biāo)，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗證；
　　 4.早發(fā)冠心病常累及單支冠狀動脈，但LAD、LCX、RCA累及率及冠脈狹窄程度與老年患者無明顯差異；
　　 第二部分早發(fā)冠心病患者HDL的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析
　　 研究目的
　　 分析HDL蛋白質(zhì)組成，并通過比較早發(fā)冠心病患者與健康對照組HDL組成成分含量的差異，探討HDL內(nèi)表達(dá)有差異的蛋白質(zhì)對早發(fā)冠心病的影響，并探討是否可以作為早發(fā)冠心病發(fā)病

7、的生物標(biāo)記物。
　　 研究方法
　　 1.研究對象：兩組人群均為2008年11月至2009年6月就診于北京阜外心血管病醫(yī)院的患者（n=90）。所有入選患者均為男性。
　　 第一組人群（15例年齡匹配的健康對照和15例早發(fā)冠心病患者）血漿標(biāo)本分離HDL，用熒光膠內(nèi)差示電泳（2D DIGE）進(jìn)行HDL差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析。
　　 第二組人群（30例年齡匹配的健康對照和30例早發(fā)冠心病患者）的血漿標(biāo)本用免疫學(xué)方法

8、驗證蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果。
　　 2.觀察指標(biāo)：
　　 （1）觀察我國健康人HDL蛋白質(zhì)組成；
　　 （2）觀察早發(fā)冠心病和健康對照組HDL之間蛋白質(zhì)含量的差異；
　　 （3）用Western及ELISA驗證蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)的差異蛋白質(zhì)；
　　 研究小結(jié)
　　 1.線性離子阱質(zhì)譜（LTQ-FT）證實健康對照組HDL是由40種蛋白質(zhì)組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體，可以分為脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白類、炎癥相關(guān)蛋白、

9、具有酶活性蛋白及其它參與細(xì)胞代謝的蛋白；
　　 2.HDL可以作為某些蛋白質(zhì)在血液循環(huán)中的載體，早發(fā)冠心病患者HDL中蛋白質(zhì)種類少于健康對照組，主要為非載脂蛋白種類的減少，說明早發(fā)冠心病患者HDL運輸載體的功能降低，但HDL中蛋白質(zhì)種類的變化是否影響HDL的功能，以及蛋白質(zhì)種類的改變是否參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程還需進(jìn)一步的研究。
　　 3.通過2D DIGE及MALDI-TOF MS技術(shù)，我們鑒定出了一系列在早發(fā)冠

10、心病HDL內(nèi)表達(dá)有差異的蛋白質(zhì)，其中，apoA-Ⅰ，apoA-Ⅳ和SAA有可能與早發(fā)冠心病發(fā)病有關(guān)。4.HDL及血漿中apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ和SAA變化趨勢與2D DIGE結(jié)果一致，因此可以用血漿中對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量評價其對早發(fā)冠心病的影響。
　　 研究目的
　　 觀察HDL-C相關(guān)因子apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ、apoE和血漿淀粉樣蛋白A（SAA）對冠心病的影響，并通過回歸模型及ROC曲線評價聯(lián)合應(yīng)用各種因子對冠心病

11、診斷的價值。
　　 研究方法
　　 1.研究對象：119例患者均為2008年11月至2009年4月就診于北京阜外心血管病醫(yī)院的患者，其中，60例心絞痛患者冠脈造影顯示至少一支冠脈血管狹窄大于50％，59例年齡、性別匹配的非冠心病患者為對照組。
　　 2.觀察指標(biāo)：
　　 （1）用免疫散射比濁法測定血漿中apoA-Ⅰ及apoB含量。
　　 （2）用ELISA測定血漿中apoA-Ⅳ、apoE及SAA含

12、量。
　　 （3）Logistic回歸逐步分析對早發(fā)冠心病的診斷篩選變量，求出Logistic回歸方程，并在SPSS的工作數(shù)據(jù)表中產(chǎn)生含各個體預(yù)測概率的新變量。使用SPSS的ROC曲線分析，以新變量為檢驗變量，以冠脈造影結(jié)果為狀態(tài)變量，將新變量與單個指標(biāo)的ROC曲線作比較并求出診斷點。
　　 研究結(jié)果
　　 1.與對照組相比，早發(fā)冠心病患者血漿apoA-Ⅰ，apoA-Ⅳ含量降低，而SAA，hs-CRP含量明顯升高

13、，apoB及apoE含量雖高于對照組但未有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2.Logistic回歸分析剔除對早發(fā)冠心病發(fā)病無顯著性影響的變量后，得出早發(fā)冠心病發(fā)病的概率預(yù)報模型：P=1/[1+e-（2.267-4.868·apoA-I+1.889·SAA-4.897·HDL-C+0.694·hsCRP）]，并在SPSS工作表中產(chǎn)生各個體預(yù)測值的另一組新變量Pre-1（predicted probability-1）。
　　 3.以新

14、變量Pre-1為檢驗變量，以冠脈造影結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，作ROC曲線分析，得出各檢驗變量的曲線下面積最大，說明此新變量對早發(fā)冠心病預(yù)測敏感度和特異性較高。
　　 4.選擇Youden指數(shù)最大的截斷點對應(yīng)的界值作為早發(fā)冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，得出新變量Pre-1診斷點為0.468。當(dāng)Pre-1取值為0.468時，其對早發(fā)冠心病的診斷的靈敏度及特異度分別為82.46％和84.75％。
　　 研究結(jié)論
　　 1.健康對照組HDL是

15、由40種蛋白質(zhì)組成的復(fù)合體，為HDL的生物學(xué)功能的多樣性提供了研究基礎(chǔ)。
　　 2.早發(fā)冠心病組HDL由34種蛋白質(zhì)組成，與健康對照組比較，主要為非載脂蛋白種類的減少，說明早發(fā)冠心病患者HDL運輸載體的功能降低。
　　 3.熒光膠內(nèi)差示電泳（2D DIGE）提示早發(fā)冠心病患者有4種蛋白質(zhì)表達(dá)出現(xiàn)差異：A-SAA和apoL1表達(dá)升高，apoA-Ⅰ和apoA-Ⅳ表達(dá)降低。
　　 4.血漿中apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ和

16、SAA含量變化與HDL中相應(yīng)蛋白質(zhì)的變化趨勢一致提示血漿apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ和SAA的變化可能成為評價早發(fā)冠心病的候選生物標(biāo)記物。
　　 5.通過測定HDL-C、apoA-Ⅰ、SAA和hsCRP等指標(biāo)轉(zhuǎn)化為一個參數(shù)Pre-1，利用Pre-1預(yù)測、診斷早發(fā)冠心病，有可能能提高診斷靈敏度及特異度，為早發(fā)冠心病診斷及預(yù)防提供更為可靠的實驗室依據(jù)。
　　 6.選擇Pre-1的ROC曲線Youden指數(shù)最大的截斷點對應(yīng)的界值