PI3K在支氣管哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的: 支氣管哮喘是以氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重建為特征的慢性疾病。但近年大量的研究發(fā)現(xiàn),哮喘患者經(jīng)常出現(xiàn)不可逆或部分不可逆氣流阻塞及持續(xù)的氣道高反應(yīng)性,目前醫(yī)學(xué)界認(rèn)為其原因是氣道發(fā)生了改變即氣道重構(gòu)。其中氣道平滑肌細(xì)胞（ASMC）增殖在氣道重構(gòu)中占有十分重要的地位。大量研究發(fā)現(xiàn)，多種刺激因素包括生長因子、血源性或炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等均可誘導(dǎo)ASMC增殖,且這些絲裂原主要通過細(xì)胞內(nèi)的一些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的介導(dǎo)而發(fā)揮作用。

2、過去一直認(rèn)為，ASMC有絲分裂增殖主要由ERK/PKC信號(hào)通路調(diào)控，近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）及其所引起的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)也作為一個(gè)極重要的第二信號(hào)通路影響ASMC增殖。PI3K是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，可催化肌醇環(huán)上3位羥基生成磷脂酰肌醇－3,4－二磷酸和磷脂酰肌醇－3,4,5－三磷酸，這些脂類主要是作為第二信使分子，在細(xì)胞信號(hào)傳遞中起重要作用。鑒于PI3K在氣道平滑肌細(xì)胞增殖中的重要作用，本研究希望發(fā)現(xiàn)在哮

3、喘氣道重構(gòu)中PI3K是否也發(fā)揮一定的作用。因此，本次試驗(yàn)的目的就是首先探討PI3K在哮喘ASMC中的表達(dá)改變，從而為研究PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘哮喘氣道重構(gòu)中的作用作出初步的判斷。
　　 方法: 根據(jù)隨機(jī)化分配原則將16只Wistar大鼠隨機(jī)均分成2組，哮喘組和正常對(duì)照組；模型建立后分別從每只大鼠分離培養(yǎng)ASMC，流式細(xì)胞檢測(cè)方法檢測(cè)ASMC的生長分?jǐn)?shù)，用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色及Western-blot方法進(jìn)行PI3K表達(dá)的檢測(cè)

4、，并利用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量對(duì)比分析。
　　 結(jié)果: 流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)哮喘組ASMC的S+G2/M期細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分比(27.90±3.44)%顯著高于正常組(13±1.56)%(P<0.05)；免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色及Western-blot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)哮喘組和正常組ASMC胞漿內(nèi)均有PI3Kp85陽性表達(dá)，且哮喘組的表達(dá)明顯高于正常組；大鼠ASMC中PI3K的表達(dá)與大鼠ASMC的生長分?jǐn)?shù)呈顯著正相關(guān)。