RF-6A細胞在不同氧濃度下的缺氧誘導因子-1α的表達和活性氧水平.pdf

1、目的：眼球新生血管發(fā)生是導致視力下降甚至失明的重要原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡相關性黃斑變性以及早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病都會引起視網(wǎng)膜的新生血管，繼而導致視力障礙。大量文獻表明，視網(wǎng)膜組織缺血缺氧，缺氧誘導因子1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)蛋白降解減少，上調血管內皮生長因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)表達是新生血管發(fā)生的基礎。因此，HIF-1α與氧濃

2、度關系密切。雖然動物實驗中通過高濃度氧處理后誘導視網(wǎng)膜新生血管模型已經(jīng)普遍應用，HIF-1α與高濃度氧的直接關系卻未明確。有文獻報道高濃度氧條件下視網(wǎng)膜組織凋亡，視網(wǎng)膜血管阻塞，VEGF受體下調，從而促血管生成因子與抗血管生成因子平衡破壞。該平衡被破壞，導致新生血管的產(chǎn)生。同時，高濃度氧產(chǎn)生過多的活性氧，誘導細胞凋亡。我們將視網(wǎng)膜血管內皮細胞置于不同氧濃度環(huán)境下檢測缺氧誘導因子-1α表達及活性氧水平，探討氧濃度，活性氧和HIF-1α三者

3、之間的相互聯(lián)系。 方法：將RF/6A細胞置于常氧21％O2、低氧1％O2以及高氧95％O2條件下，同時添加活性氧處理組，即細胞滴加0.3％過氧化氫1.5ml后放置常氧條件下。4組各孵育3h，取出后利用免疫組織化學方法檢測其HIF-1α表達，使用活性氧檢測試劑盒觀察活性氧水平。 結果： 1．各組HIF-1α蛋白表達：低氧組、高氧組及活性氧組HIF-1α表達明顯，棕黃色著色主要沉著于細胞胞漿，高氧組細胞胞核也可見著色

4、。經(jīng)統(tǒng)計分析示低氧組、高氧組及活性氧組HIF-1α表達明顯高于常氧組(P＜0.01)且前三組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 2．各組活性氧測定：低氧組、常氧組未見明顯熒光，高氧組及活性氧組胞質熒光顯色明顯。經(jīng)統(tǒng)計學分析，高氧組與活性氧組、低氧組與常氧組活性氧水平無明顯差異(P＞0.05)，其余各組間均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。 結論：相較常氧濃度條件，高氧濃度下細胞內HIF-1α表達增多；相較低氧及常氧濃度條

5、件，高氧濃度下活性氧水平增高?；钚匝跛脚cHIF-1α表達存在相關性。外源性活性氧也可增加HIF-1α的表達。高氧濃度下HIF-1α表達增高可能是基于胞內增多的活性氧所致，HIF-1α的穩(wěn)定性及其活性與細胞內部活性氧水平相關，細胞內活性氧水平可能是作為體內氧濃度環(huán)境改變的感受器，通過PI3K/Akt及MARK途徑影響HIF-1α的表達，從而引起機體一系列針對氧濃度變化的效應。因此，進一步了解高氧濃度下HIF-1α表達增多的原因以及非缺氧