肉蓯蓉屬4種肉蓯蓉的差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、論文以肉蓯蓉屬4種肉蓯蓉(荒漠肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、管花肉蓯蓉和沙蓯蓉)為材料，利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)，研究了肉蓯蓉屬可溶性蛋白質(zhì)的特性，主要結(jié)果如下： 1.建立了適合肉蓯蓉屬可溶性蛋白質(zhì)的SDS-PAGE凝膠電泳技術(shù)方法：1)建立了肉蓯蓉屬可溶性蛋白的提取方法：采用冷凍干燥→提取液[1mol/LFris-HCL(pH6.8)5％(V/V)；雙蒸水75％(V/V)；PVP2％；苯甲基黃酰氟(PMSF)1mmol/l]→4℃離心

2、→5mol/L的KAc沉淀→4℃離心→-20℃丙酮沉淀→4℃離心的技術(shù)路線，能較好的提取肉蓯蓉的可溶性總蛋白，避免多糖、酚類等雜質(zhì)成分對(duì)后續(xù)電泳的干擾。2)建立了適合肉蓯蓉屬可溶性蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳技術(shù)方法：電泳時(shí)采用的參數(shù)為：濃縮膠T=3％；分離膠T=16％；電泳開(kāi)始時(shí)電壓為180V，電泳進(jìn)入分離膠時(shí)電壓調(diào)為210V。 2.采用SDS-PAGE電泳分離技術(shù)和AlphaImager2200軟件分析方法，對(duì)4種肉蓯蓉蛋白質(zhì)

3、表達(dá)譜進(jìn)行比較研究，肉蓯蓉屬的4種肉蓯蓉在電泳膠上清晰地分離出大約15條蛋白帶，多態(tài)性條帶占86.67％，蛋白帶分子量范圍為15.9KD～84.1KD。四種肉蓯蓉都具有兩條可溶性蛋白圖譜共有條帶，其分子量分別為29.4KD、23.2KD，其它13條帶有不同程度的差異。分子量為21.5KD是沙蓯蓉特有的條帶、分子量為84.1KD是管花肉蓯蓉特有的條帶、分子量為17.5KD條帶是鹽蓯蓉特有的條帶、分子量為18.5KD是荒漠肉蓯蓉特有的條帶。

4、 3.利用LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用的串聯(lián)質(zhì)譜和MASCOT檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，鑒定了各個(gè)種的特異蛋白帶。沙蓯蓉特異蛋白質(zhì)條帶共鑒定出9個(gè)蛋白質(zhì)，荒漠肉蓯蓉特異蛋白質(zhì)條帶共鑒定出15個(gè)蛋白質(zhì)，鹽生肉蓯蓉特異蛋白質(zhì)條帶共鑒定出26個(gè)蛋白質(zhì)，管花肉蓯蓉特異蛋白質(zhì)條帶共鑒定出20個(gè)蛋白質(zhì)，其中有7未知蛋白(unknownprotein)或未命名蛋白(unnamedprotein)。沙蓯蓉的特異蛋白大部分是與合成有關(guān)的酶；荒漠肉蓯蓉的特異蛋

5、白大部分是與抗逆和能量代謝有關(guān)的酶；管花肉蓯蓉的特異蛋白大部分是與抗逆有關(guān)的酶和結(jié)構(gòu)蛋白；鹽生肉蓯蓉的特異蛋白大部分是與信號(hào)傳遞有關(guān)的蛋白。 4.研究了5個(gè)不同寄主的管花肉蓯蓉可溶性蛋白SDS-PAGE電泳圖譜，其多態(tài)性條帶為77.78％，在膠上清晰的分析出9條帶，分子量范圍為14.8～87.0KD。分子量為46.5KD和29.6KD是5個(gè)材料共有的帶，其它7條帶有不同程度的差異。 5.以8個(gè)經(jīng)過(guò)航空搭載的荒漠肉蓯蓉種子

6、的M1代群體為研究材料，對(duì)8個(gè)材料的可溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE分析，8個(gè)材料的可溶性蛋白的SDS-PAGE圖譜，在膠上清晰的分析出5條帶，其多態(tài)性為80.00％，其分子量范圍在31.9～65.3KD之間。如在分子量為45.5KD和31.9KD2條帶是8個(gè)材料共有的帶，其它3條帶有不同程度的差異。 對(duì)肉蓯蓉屬差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，可為其品質(zhì)形成的分子機(jī)理和生理機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)，也可以為肉蓯蓉屬種質(zhì)鑒定、親緣關(guān)系分析提供理論