四種醫(yī)用金屬對L-929細胞毒性及MMP-1表達影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 生物醫(yī)用金屬材料在口腔材料中是應用最多最廣的一類材料。新型醫(yī)用無鎳高氮奧氏體不銹鋼(BIOSSN4)是由中科院金屬研究所研制的適合我國現(xiàn)有國情的一種高性價比的用于鑄造支架及弓絲的金屬材料,它良好的機械性能已經(jīng)通過實驗得到驗證,但生物相容性還需要進一步的研究,為其廣泛應用于臨床提供依據(jù)。本文利用熒光顯微鏡觀察四種醫(yī)用金屬(BIOSSN4、Aualloy、317L、Co-Cralloy)引起小鼠L-929成纖維細胞的形

2、態(tài)變化及MTr細胞毒性檢測和MMP-1ELISA檢測,從細胞和細胞外基質(zhì)兩個方面研究四種醫(yī)用金屬的生物相容性。
　　 材料和方法:
　　 細胞培養(yǎng):L-929細胞用含10%胎牛血清RPMI1640細胞培養(yǎng)液在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。
　　 細胞形態(tài)學檢測:設立實驗組:①新型無鎳高氮奧氏體不銹鋼組(BIOSSN4)②金合金組③奧氏體不銹鋼組(317L不銹鋼組)④鈷鉻合金組(Co-Cr);陰性對照組:陽

3、性鉛Pb對照組。其中五種金屬浸提液和含10%胎牛血清RPMI1640細胞培養(yǎng)液分別培養(yǎng)L-929細胞48小時后,采用Hoechst33342/PI染色法在熒光顯微鏡下對活細胞、凋亡細胞、壞死細胞進行觀測。
　　 MTT細胞毒性實驗用四個實驗組金屬材料的浸提液、陰性對照培養(yǎng)液、陽性對照金屬鉛浸提液培養(yǎng)L-929細胞,從而比較四個實驗組金屬材料的細胞毒性。
　　 MMP-1ELISA檢測用四個實驗組金屬材料的浸提液培養(yǎng)L-9

4、29細胞,比較各組分泌MMP-1的量,進而說明各組金屬材料對細胞外基質(zhì)的影響。
　　 結果:
　　 1、各組細胞加樣培養(yǎng)48h后Hoechst33342/PI雙染,熒光顯微鏡觀察各實驗組均有凋亡、壞死細胞。317L組凋亡細胞較多,陽性鉛Pb對照組壞死細胞很多。其它實驗組與陰性對照組相比無明顯改變。
　　 2、MTT結果:24h、48h、72hL-929細胞在各金屬浸提液中細胞相對增殖率都有所上升,毒性評級結果:各

5、實驗組均有輕微細胞毒性。
　　 3、隨著時間的增加,各實驗組分泌的MMP-1量有上升趨勢。說明隨時間延長,MMP-1分泌量增加,破壞膠原纖維,附著喪失,會進一步加重炎癥反應。各組分泌MMP-1量由小到大依次為:陰性對照組＜金合金組＜鈷鉻合金組＜BIOSSN4組＜317L組,且各實驗組有顯著差異。
　　 結論:
　　 1、實驗金屬生物相容性由好到差依次是:金合金＞新型醫(yī)用無鎳高氮奧氏體不銹鋼、鈷鉻合金＞奧氏體不銹鋼