綠豆胰蛋白酶抑制劑活性片段的表達(dá)純化及生物學(xué)活性研究.pdf

1、蛋白酶抑制劑幾乎存在于所有的動(dòng)植物中，其生理作用廣泛，不僅可以抑制多種蛋白酶的活性，而且可通過(guò)抑制細(xì)胞浸潤(rùn)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡在抗腫瘤上發(fā)揮很大的作用。研究證實(shí)Bowman-Birk類抑制劑具有潛在的抗癌效應(yīng)，它作為一種有效的抗癌因子具有一些獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)腫瘤抑制作用是不可逆的，且在低濃度下可有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移，應(yīng)用范圍較廣。但目前對(duì)胰蛋白酶抑制劑的抗癌機(jī)理仍不十分清楚，所以研究胰蛋白酶抑制劑對(duì)腫瘤的抑制作用機(jī)制顯得尤為重要。

2、r>　　綠豆胰蛋白酶抑制劑屬Bowman-Birk類蛋白酶抑制劑，具有兩個(gè)活性中心，分別為L(zhǎng)ys和Arg，分子量約為8 kDa。目前對(duì)綠豆胰蛋白酶抑制劑晶體結(jié)構(gòu)和其理化特性的研究較深入，而對(duì)其生物學(xué)活性研究較少。本研究主要研究重組綠豆胰蛋白酶抑制劑的Lys活性片段對(duì)腸癌細(xì)胞的影響，并探討其影響機(jī)制。
　　本研究利用大腸桿菌原核表達(dá)重組綠豆胰蛋白酶抑制劑(recombinant mungbean trypsin inhibitor,

3、 rMBTI)的Lys活性片段（LysGP33），GST親和層析柱對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化，并對(duì)純化的LysGP33進(jìn)行胰蛋白酶抑制劑活性測(cè)定，通過(guò)MTT比色法和細(xì)胞劃痕方法檢測(cè)LysGP33活性片段對(duì)不同腸癌細(xì)胞增殖和遷移的影響，并通過(guò)熒光定量PCR和Western blotting方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)與遷移有關(guān)的基因及蛋白的表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，重組綠豆胰蛋白酶抑制劑的Lys活性片段具有抑制胰蛋白酶的活性。通過(guò)生物學(xué)活性研究，發(fā)現(xiàn)重組綠豆胰蛋