茶多酚抗腎臟缺血再灌注損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、缺血再灌注損傷（Ischemia/Reperfusion Injury，IRI）是臨床上一種常見的病理生理現(xiàn)象，其中，大量自由基的產(chǎn)生是造成細(xì)胞損傷和功能損傷的首要因素。近年來，隨著影像技術(shù)的廣泛應(yīng)用，早期腎癌診斷率明顯提高。針對早期腎細(xì)胞癌，采用保留腎單位手術(shù)（NSS）可以獲得與腎癌根治切除術(shù)同樣的療效。目前國際上有學(xué)者提出NSS理想患者應(yīng)是：對側(cè)腎功能正常，無癥狀的偶發(fā)腫瘤大小在3．5cm以下并且是T1．T2期。如何減輕術(shù)中因腎缺血

2、及再灌注后所導(dǎo)致的腎實(shí)質(zhì)及腎功能的損傷是目前臨床上亟待解決的重要問題。 目的：通過建立單側(cè)腎臟缺血再灌注損傷模型，探討靜脈內(nèi)給予強(qiáng)效抗氧化劑茶多酚以抗腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)用SD大鼠30只，體重260±20g，隨機(jī)分為A、茶多酚高劑量組（TP100mg/kg），B、茶多酚低劑量組（TP50mg/kg），C、維生素C組（vitC200mg/kg），D、腎缺血再灌注組，E、假手術(shù)組，每

3、組6只。A、B、C3組于再灌注前10分鐘左股靜脈注射相應(yīng)藥物，勻速靜注約1分鐘。 2、動物模型制作手術(shù)采用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔內(nèi)注射麻醉，取左側(cè)腰背部平行脊柱切口鈍性分離腰大肌以及與其粘連之脂肪，進(jìn)入腹膜后間隙即可見左側(cè)腎臟，用血管鉗輕壓固定腎臟及腎蒂，上提腰大肌，平行脊柱可見腹主動脈，于腎蒂近腹主動脈部用玻璃分針分離出左腎動脈，無損動脈夾阻斷左腎動脈，同時開始記時，觀察腎臟顏色變成暗紅至暗黑色。阻斷左腎動脈45分

4、鐘后，移去血管夾，恢復(fù)腎動脈供血，觀察到腎臟在短時內(nèi)由暗黑色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色（提示腎臟恢復(fù)血供）。 3、標(biāo)本取材各組大鼠于24h后分別取左側(cè)腎臟，于腎門處正中橫斷，上半部立刻放于-77攝氏度冰箱凍存，備做組織勻漿。下半部放于10%甲醛固定，備做病理切片。 4、結(jié)果檢測（1）左腎組織SOD、MDA的活性及含量（2）光鏡下病理切片HE染色。 結(jié)果： 1、左腎組織SOD活性的變化腎組織SOD活性A組、B組、C組

5、、D組有逐漸降低的趨勢但是低于E組，與E組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，A組與D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，B組、C組與D組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，A組與B組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與C組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，B組與C組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2、左腎組織MDA含量的變化腎組織MDA含量A組、B組、C組、D組有逐漸升高的趨勢且均高于E組，A組、B組及C組與E組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，A組、B組、C組及E組與D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，A組、B組、C組

6、三組之間相互比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 3、病理切片HE染色光鏡下左腎組織形態(tài)學(xué)變化HE染色E組大鼠腎小球、腎小管未見異常改變。D組腎小球未見異常改變，腎近球小管上皮細(xì)胞大片壞死，管腔擴(kuò)張，管內(nèi)可見脫落細(xì)胞碎片及蛋白樣管型，上皮細(xì)胞核固縮、碎裂，胞漿空泡變性壞死，各細(xì)胞間隙變大，腎間質(zhì)充血水腫及炎性細(xì)胞侵潤。A組腎小球未見異常改變，腎近球小管管腔擴(kuò)張，管內(nèi)可見少量脫落細(xì)胞碎片，未見蛋白樣管型，上皮細(xì)胞腫脹，空泡樣變性，細(xì)胞間隙變大，腎間

7、質(zhì)充血水腫及少量炎性細(xì)胞浸潤，B組、C組損害范圍及程度較A組重，較D組明顯輕。 結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)可以成功建立保留對側(cè)腎臟，患側(cè)腎臟缺血再灌注動物模型，保證術(shù)后大鼠在24小時內(nèi)保持良好的狀態(tài)，完成我們所需要的指標(biāo)檢測。 2、通過靜脈注射強(qiáng)效抗氧化劑茶多酚及維生素C可以減輕腎缺血再灌注時造成的腎損害，尤以茶多酚高劑量組（TP100mg/kg）明顯，其機(jī)制是通過引發(fā)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，上調(diào)SOD活性，直接或間接清除氧