輸尿管逆向注射重組腺病毒介導(dǎo)的BMP-7在大鼠腎間質(zhì)損害的作用及三七總皂甙干預(yù)實(shí)驗(yàn).pdf

1、目的：構(gòu)建出具有轉(zhuǎn)染后能表達(dá)活性的骨形態(tài)形成蛋白-7的重組腺病毒。將已構(gòu)建好的重組腺病毒直接導(dǎo)入腎纖維化大鼠腎臟，觀察其抗腎纖維化的作用，為腺病毒介導(dǎo)BMP-7的進(jìn)一步基因治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；同時(shí)對(duì)照研究三七總皂甙對(duì)腎間質(zhì)纖維化和BMP-7的影響與機(jī)制。
　　方法：無(wú)菌級(jí)雄性SD大鼠64只隨機(jī)分為四組：（1）假手術(shù)組（S）：大鼠手術(shù)剖腹后僅游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎。（2）單側(cè)輸尿管梗阻組（U）：大鼠行手術(shù)剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎

2、左側(cè)輸尿管。（3）BMP-7治療組（B）：大鼠行手術(shù)剖腹，自結(jié)扎處以上的輸尿管逆行注射包含無(wú)菌生理鹽水BMP-7病毒的混合液，注射后局部壓迫片刻并隨即于注射處上方結(jié)扎輸尿管，在兩處結(jié)扎之間離斷輸尿管。（4）三七總皂甙治療組（P）：大鼠行手術(shù)剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎左側(cè)輸尿管，術(shù)后每晚給予三七總皂甙（PNS）腹腔注射1次,每只大鼠每次注射100mg/kg。S組、B組和U組同時(shí)給予同樣劑量的蒸餾水，腹腔注射。造模后第7、14、21、28d每

3、組處死四只大鼠，取左側(cè)腎臟進(jìn)行病理切片觀察，并作指標(biāo)檢測(cè)。以免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎組織中α-SMA蛋白的表達(dá)水平，以逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)TGF-β1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：光鏡下觀察，HE及Masson染色S組未見(jiàn)異常。HE染色可見(jiàn)U組、B組及P組各時(shí)相點(diǎn)大鼠腎臟腎小球均無(wú)明顯變化。U組術(shù)后第7天腎小管擴(kuò)張明顯，上皮細(xì)胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)寬度明顯增加，偶見(jiàn)萎縮腎小管；第14天上述病變加重，可

4、見(jiàn)彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質(zhì)及外髓萎縮的腎小管較多，間質(zhì)中大量淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化較明顯。Masson染色可見(jiàn)U組術(shù)后7天腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)寬度增加，膠原纖維增加，染色加深此后，病變逐漸加重。P組與B組平行相比腎小管間質(zhì)病變程度明顯減輕，腎間質(zhì)相對(duì)面積明顯減少(P<0.01)。三組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：與S組相比，U組腎小管間質(zhì)α-SMA表達(dá)及腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)明顯

5、增高（P<0.05）。UUO術(shù)后7天和14天，可見(jiàn)α-SMA陽(yáng)性的轉(zhuǎn)化分化小管上皮細(xì)胞；術(shù)后21天，轉(zhuǎn)分化的小管上皮細(xì)胞明顯減少。與U組相比，B組、P組治療后腎小管間質(zhì)α-SMA表達(dá)顯著減少（P<0.05），并且B組低于P組，（P<0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示：TGF-β1隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增多，第28天，有所下降，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在治療組，B組和P組均比同一識(shí)相點(diǎn)U組減少，（P<0.05）.
　　結(jié)論：
　　（1）

6、單側(cè)輸尿管結(jié)扎可以快速建立腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型。
　?。?）在本課題研究中，將治療基因BMP-7成功、高效地轉(zhuǎn)移到腎臟的病灶部位，能夠明顯減輕腎間質(zhì)纖維化，下調(diào)TGF-β1的表達(dá)，從而發(fā)揮其在單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型中對(duì)腎臟的保護(hù)作用，延緩和抑制了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展。BMP-7并能有效抑制腎小管間質(zhì)炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)和小管間質(zhì)損傷。
　?。?）PNS能有效減輕UUO大鼠腎小管間質(zhì)的損傷，抑制α-SMA和TGF-β1的表達(dá)。