Irx5a對(duì)于斑馬魚(yú)早期造血發(fā)育轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的影響.pdf

1、目的：為了解Irx5a基因?qū)υ缙谠煅l(fā)育的影響，檢測(cè)Irx5a對(duì)野生型斑馬魚(yú)基因表達(dá)量的變化；通過(guò)過(guò)表達(dá)Irx5a基因?qū)υ煅l(fā)育表達(dá)相關(guān)的造血轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達(dá)情況影響。
　　方法:構(gòu)建Irx5a-EGFP-pCS2+重組質(zhì)粒,驗(yàn)證其正確性后，制備Irx5a-EGFP正義mRNA探針,通過(guò)顯微注射技術(shù)導(dǎo)入野生型斑馬魚(yú)（Tuebingen）中，觀察其在野生型斑馬魚(yú)胚胎中的表達(dá)情況。另外，以導(dǎo)入Irx5a-EGFP mRNA探針為實(shí)驗(yàn)

2、組、EGFP mRNA探針為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、野生型斑馬魚(yú)為空白對(duì)照組，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)檢測(cè)造血轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子如 scl、lmo2、c-myb、runx-1、gata-1、pu.1在實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組中的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建Irx5a-EGFP-pCS2+重組質(zhì)粒；通過(guò)顯微注射Irx5a-EGFP mRNA發(fā)現(xiàn)，在斑馬魚(yú)胚胎3hpf開(kāi)始出現(xiàn)綠色熒光，在12hpf-18hpf時(shí)熒光表達(dá)量最強(qiáng)，其后熒光表達(dá)也逐

3、漸減弱，至30hpf時(shí)熒光幾乎消失，僅在斑馬魚(yú)的眼睛有極少量的表達(dá)；Irx5a-EGFP mRNA作為實(shí)驗(yàn)組，EGFP mRNA作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，野生型斑馬魚(yú)作為空白對(duì)照組，三組相比較基因表達(dá)量相對(duì)定量中可知：lmo2、scl、runx-1、pu.1實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量較另兩組表達(dá)量低，三組均隨著時(shí)相的增加基因表達(dá)量也增加，在12hpf中的表達(dá)量最高，以后逐漸減弱；但是c-myb、gata-1、中在18hpf中的表達(dá)量最高，以后逐漸減弱。