基于黃嘌呤氧化酶靶點(diǎn)虎杖抗高尿酸血癥物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、痛風(fēng)是長(zhǎng)期嘌呤代謝障礙、血尿酸增高引起的代謝性疾病，高尿酸血癥是痛風(fēng)的重要生化基礎(chǔ)。黃嘌呤氧化酶作為尿酸生成的關(guān)鍵酶，是降低尿酸藥物的作用靶點(diǎn)。虎杖藥材為蓼科植物虎杖（Polygonum cuspidatum Sielb. et Zucc）的干燥根莖和根。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道虎杖提取物具有黃嘌呤氧化酶抑制活性，能夠顯著降低高尿酸血癥動(dòng)物模型血尿酸水平，但缺乏虎杖提取物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制活性物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的系統(tǒng)深入研究。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)考

2、察不同色譜柱、流動(dòng)相組成和檢測(cè)波長(zhǎng)，建立了虎杖提取物HPLC分析方法。采用大孔吸附樹(shù)脂的分離模式進(jìn)行分離，使用所建立的HPLC分析方法檢測(cè)分離效果。結(jié)果顯示，各洗脫部位分離效果良好。采用HPLC法測(cè)定黃嘌呤氧化酶-黃嘌呤反應(yīng)體系尿酸生成量，體外測(cè)定不同分離部位抑制作用。結(jié)果顯示，除水洗脫部位外，各洗脫部位均具有一定抑制活性，其中30％和50%洗脫部位活性較高（50μg/mL濃度下抑制率分別為69.04±0.47%和51.22±1.14%

3、）。
　　綜合運(yùn)用大孔吸附樹(shù)脂柱色譜、十八烷基鍵合硅膠柱色譜（ODS）和制備液相色譜等方法從虎杖30%和50%大孔樹(shù)脂洗脫部位中分離得到8個(gè)化合物；綜合運(yùn)用EI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：虎杖苷（化合物 I），白藜蘆醇（化合物II），大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物III），決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物IV），大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物V），大黃素甲

4、醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物 VI），大黃素（化合物 VII），大黃酚（化合物VIII）。
　　黃嘌呤氧化酶體外酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)6種化合物具有一定的抑制活性。其中白藜蘆醇和決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷相對(duì)較高，IC50分別為91.04μM和54.31μM。采用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法確定活性化合物抑制類型，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇為競(jìng)爭(zhēng)型抑制，決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷為非競(jìng)爭(zhēng)型抑制。決明酮-